- 1、本文档共13页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
L1120细胞培养实验报告终结版
L1120细胞培养
L1120细胞培养
一.实验目的
1.了解培养室的设置和设备。
2.学习无菌概念和无菌操作要领,熟练各实验器材的使用。
3.学习并掌握L1120细胞培养使用的器皿、器械的洗涤,消毒和灭菌。
4.熟练掌握培养基(RPMI1640)的配制,了解其它培养基的配制方法。
5.掌握L1120细胞传代培养的方法。
6.掌握细胞冷冻,复苏的方法.
7. 掌握体外培养L1120细胞的常规检查内容及方法。
二.实验原理
L1120细胞是一种肿瘤细胞。肿瘤细胞在组织培养中占有核心的位置,首先癌细胞是比较容易培养的细胞。当前建立的细胞系中癌细胞系是最多的。另外肿瘤对人类是威胁最大的疾病。肿瘤细胞培养是研究癌变机理、抗癌药检测、癌分子生物学极其重要的手段。肿瘤细胞培养对阐明和解决癌症将起着不可估量的作用。
组织培养肿瘤细胞生物学特性
(-)形态和性状
培养中癌细胞无光学显微镜下特异形态,大多数肿瘤细胞镜下观察比二倍体细胞清晰,核膜、核仁轮廓明显,核糖体颗粒丰富。电镜观察癌细胞表面的微绒毛多而细密,微丝走行不如正常细胞规则,可能与肿瘤细胞具有不定向运动和锚着不依赖性有关。?(二)生长增殖
肿瘤细胞在体内具有不受控增殖性,在体外培养中仍如此。正常二倍体细胞在体外培养中不加血清不能增殖,是因血清中含有很细胞增殖生长的因子,而癌细胞在低血清中(2%~5%)仍能生长。已证明肿瘤细胞有自泌或内泌性产生促增殖因子能力。正常细胞发生转化后,出现能在低血清培养基中生长的现象,已成为检测细胞恶变的一个指标。癌细胞或培养中发生恶性转化后的单个细胞培养时,形成集落(克隆)的能力比正常细胞强。另外癌细胞增殖数量增多扩展时,接触抑制消除,细胞能相互重叠向三维空间发展,形成堆积物。?(三)永生性??? 永生性也称不死性。在体外培养中表现为细胞可无限传代而不凋亡(Apoptosis)。从近年建立细胞系或株的过程说明,如果永生性是体内肿瘤细胞所固有的,肿瘤细胞应易于培养。事实上,多数肿瘤细胞初代培养时并不那么容易。生长增殖并不旺盛;经过纯化成单一化瘤细胞后,也大多增殖若干代后,便出现类似二倍体细胞培养中的停滞期。过此阶段后才获得永生性,顺利传代生长下去。从而说明体外肿瘤细胞的永生性有可能是体外培养后获得的。永生性和恶性(包括浸润性)是两种性状,受不同基因调控,但却有相关性。可能永生性是细胞恶变的阶段。
?(四)浸润性??? 浸润性是肿瘤细胞扩张性增殖行为,培养癌细胞仍持有这种性状。在与正常组织混合培养时,能浸润入其它组织细胞中,并有穿透人工隔膜生长的能力。?(五)异质性??? 所有肿瘤都是由有增殖能力、遗传性、起源、周期状态等性状不同的细胞组成。异质性构成同一肿瘤内细胞的活力有差别的瘤组织;处于瘤体周边区的细胞获得血液供应多,增殖旺盛,中心区有的细胞衰老退化,有的处于周期阻滞状态,那些呈活跃增殖状态的细胞称干细胞(Stem Cells)、只有这些干细胞才是支持肿瘤生长的成分。肿瘤干细胞培养时易于生长增殖;把干细胞分离出来的培养方法称干细胞培养。?(六)细胞遗传??? 大多数肿瘤细胞有遗传学改变,如失去二倍体核型、呈异倍体或多倍体等。肿瘤细胞群常由多个细胞群组成,有干细胞系和数个亚系,并不断进行着适应性演变。?(七)其它??? 肿瘤细胞在体外不易生长的原因可能由于:①依赖性:肿瘤细胞虽有较强克隆生长力,但仍有一定的群体性或与其它细胞相依存关系。一是肿瘤细胞与肿瘤细胞的相互依存,二是肿瘤细胞与基质成纤维细胞的依赖。体外分散培养和排除成纤维细胞后也会同时消除或减弱这些依存关系,可能影响癌细胞增殖生长的活性;②肿瘤细胞的自泌也会因分散培养而被稀释,达不到肿瘤生长的需求,降低肿瘤细胞的生长增殖力;③并非所有肿瘤细胞都有强的生长活力和长的Life Span,只有干细胞才有强的增殖生长能力,但这些细胞数量很少;④离体培养肿瘤细胞可能需求与体内相似的特殊生存条件。
实验器皿的清洗与消毒
L1120细胞培养技术要求在无菌操作条件下进行,避免微生物及其他有害因素的影响。在L1120细胞培养培养过程中,离体细胞对任何毒性物质都十分敏感。毒性物质包括解体的微生物及细胞残余物以及非营养的化学物质,因此对新采用和重新使用的培养皿等培养用品都要严格清洗和消毒。
1. 消毒灭菌概念
消毒 具有杀死致病微生物的作用或方法,称为消毒。通常只能消灭物体表面或环境中的一部分微生物,有能达到消灭所有微生物。
灭菌 指彻底杀菌,即用物理或化学等方法,杀死物体上的一切微生物,以及它们的芽胞和孢子,使物体成为无菌状态。
2. 消毒灭菌方法
⑴ 物理消毒灭菌法
通过高潮、射线、微波以及器
您可能关注的文档
- 2012 pe、vc要hold住.doc
- 2012 年春季广西南宁市初中毕业班第二次中考适应性测试物理(含答案).doc
- 2012---年度工作计划.doc
- 2012 高效课堂教学模式 安徽省教育科学研究重点项目.doc
- 2012-13-高3课标全国综合-全年策划.doc
- 2012--2013学年度哈尔滨市第113中9月月考试题化学.doc
- 2012-2013学年度第一学期八年级英语半期考试试卷.doc
- 2012-2013年度上学期七年级思品第一单元试卷.doc
- 2012.06《临床医学概论》32课时课.doc
- 2012.年保健宣传资料.doc
- 全国优质课一等奖人音版四年级音乐上册《大雁湖》获奖课件(内嵌音乐视频).pptx
- 全国优质课一等奖人音版四年级音乐上册《牧歌》课件(内嵌音乐视频).pptx
- 大数据开发与应用项目需求.docx
- 全景教学空间建设项目需求.docx
- 基于生成式AI和数字人构建仿真法庭模拟训练系统用户需求书.docx
- 健康医疗大数据工程中心应用软件建设需求.docx
- 浙江版5年高考3年模拟A版2024年物理总复习专题十五波粒二象性教师用书.docx
- 河南湿封市第十中学2024_2025高二生物下学期第一次月考试题.doc
- 云南省昆明市云南师范大学附属中学2025届高三语文适应性月考试题八含解析.doc
- 四川省绵阳南山中学2025届高三政治上学期一诊模拟考试试题扫描版.doc
最近下载
- 2023-2024学年北京市北京师范大学附属实验中学高二上学期12月月考物理试卷含详解.docx VIP
- 新教科版小学科学四年级上册2.1《感受我们的呼吸》教学设计.docx
- 2021年秋新苏教版五年级上册科学全册教学课件.pptx
- 2024全国青少年“学宪法讲宪法”知识竞赛试题(附含答案).pdf
- 2024年养老护理职业技能大赛:为外伤出血老年人包扎止血实操流程讲解.docx
- 部编版《道德与法治》四年级下册第12课《家乡的喜与忧》教学课件(第1课时).pptx
- 学前教育学第七讲学前教育课程郑玉莲博士副教授贵州师范学院教育科学学院学习目标.ppt
- 外研版初二英语上册知识点总结 .doc VIP
- 《手术室植入物管理规范》(TCAME 65-2024).pdf VIP
- 《运动损伤与康复》课程教学大纲.docx VIP
文档评论(0)