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一、分析方法的建立 分析方法的选择 分析方法建立的一般程序 (一) (二) (一) 分析方法的选择 HPLC, GC HPLC-MSn, GC-MS RIA, EIA, FIA; 适用于大分子 TDM应用较多 抗生素生物利用度, 等效性, TDM 应用较少 常用的检测方法: 色谱分析法, 免疫分析法 和生物学方法 (二) 分析方法建立的一般程序 待测物,内标(必要时)的标准物质 色谱柱(填料),流动相,溶剂,进样量 试剂/溶剂试验; 生物介质试验 质控样品试验 代谢产物对待测物,内标物的干扰 配伍用药的干扰 分析方法的建立和验证过程系同步进行 为便于讨论, 以色谱分析法为例分别叙述 1. 色谱条件 的筛选 2. 色谱条件 的优化 3. 实际样品 的测试 二、分析方法的验证 特异性 标准曲线与定量范围 定量下限 (一) (二) (三) 精密度与准确度 (四) 样品稳定性 (五) 提取回收率 (六) 方法 样品 二、分析方法的验证 分析过程的质量控制 未知样品浓度超限的处理 药用内源性物质的测定 (七) (八) (九) 微生物/免疫学方法的验证 (十) 名词解释 (十一) 分析 其他 (一) 特异性 比较标准物质与6个不同个体的空白生物介质和QC样品 软电离质谱(LC-MS)介质效应 比较QC样品和至少6个不同个体用药后的实际样品 必要时LC-DAD/MS确证峰的单一/同一 比较待测药物, 同服药物,待测药物的QC样品和添加有同服药物的干扰样品 特异性(specificity), 又称专属性或专一性, 通常与选择性(selectivity)互用 1.内源性物质 2.未知代谢物 3.伍用药物 4.参比方法 参比方法横坐标(x), 拟定方法纵坐标(y), 最小二乘 y=a+bx a恒定干扰 b比例干扰(如, 标记抗原不纯, 交叉免疫) (二) 标准曲线与定量范围 1. 标准曲线的建立 (二) 少数方法(如,IA)外, 通常为线性模式 线性回归: 最小二乘法或加权最小二乘法 自变量(x)为药物浓度, 因变量(y)为响应信号强度 (1) 系列标准溶液: n≥6(不包括0点); 等比系列(2~3); 通常为100~1000倍 (2) 内标溶液: 浓度相当于系列标准溶液的几何平均浓度 (3) 系列标准样品: 空白生物介质, 加入系列标准溶液 (4) 标准曲线的绘制: 药物浓度, 以单位体积(如血浆)或质量(如肝脏)的生物介质中加入标准物质的量表示 (二) 标准曲线与定量范围 2. 限度要求 通常用至少6个浓度建立标准曲线 非线性相关(如IA)可能需要更多浓度点 定量范围覆盖全部待测样品浓度范围 定量上限(ULOQ)高于用药后的峰浓度(Cmax) 定量下限(LLOQ)低于Cmax的10%~5%(1/10~1/20) 标准曲线各浓度点的回归计算值(x’)与标示值(x)之间的偏差〔bias=[(x’-x)/x]×100%〕在可接受的范围之内 最低浓度点的偏差在±20%以内 其余浓度点的偏差在±15%以内 (三) 定量下限 1. 测定法 取同一生物介质,制备至少5个独立的标准样品,其浓度应使信噪比(S/N)大于5,依法进行精密度与准确度验证 定量下限(LLOQ): 标准曲线上的最低浓度点 符合准确度和精密度要求 2. 限度要求 准确度应在标示浓度的80%~120%范围内,相对标准差(RSD)应小于20% * * L/O/G/O 药物分析 Pharmaceutical Analysis 第五章 体内药物分析 第五章体内药物分析 常用体内样品的制备与贮藏 1 体内样品分析的前处理 2 体内样品分析方法与方法验证 3 第五章 熟悉: 体内样品的采集与制备方法 体内样品分析方法验证的技术要求 了解: 体内药物分析的性质与意义 掌握: 体内药物分析的特点和应用 体内样品分析的前处理 体内样品分析方法验证的内容 体内药物分析 学习要求 体内药物分析的特点和应用 体内样品分析的前处理 体内样品分析方法验证内容 体内药物分析的性质与意义 体内样品的 采集与制备方法 体内样品分析方法 验证的技术要求 掌握 了解 熟悉 概述 体内药物分析 方法建立与验证 净化与浓集 原形,代谢物 体液或组织 色谱; 免疫分析; 生物 全面验证和部分验证 原形药物或其代谢物 缀合物, 蛋白结合物 体内样品 存在形式 样品制备 分析方法 去蛋白; 萃取; 膜分离 水解; 化学衍生化 血液是主要样品 尿液,唾液,头发和脏器 体液 组织 排泄物 一、体内样品的种类 血液; 唾液