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花生肽膜分离制备及抗氧化活性研究 　　摘 要：热轧花生粕经过双菌种混菌固态发酵，将发酵产物溶解后经过膜分离得到1 ku以下、1～3 ku、3～10 ku、10 ku以上四种分子量范围的发酵滤过液。对四种分子量范围的滤过液分别以不同的浓度进行羟自由基清除、DPPH自由基清除、还原力、铁离子螯合力试验，并以还原型谷胱甘肽作比较，发现3～10 ku分子量范围的滤过液具有最高的抗氧化活性，其次为10 ku以上的滤过液，然后是1～3 ku的滤过液，1 ku以下的滤过液抗氧化活性最低。 　　关键词：滤过液；抗氧化；膜分离 　　中图分类号：S565.2；Q516 文献标识号：A 文章编号：1001-4942（2012）12-0032-04 　　Membrane Preparation of Peanut Peptides and Research 　　on Their Antioxidant Activity 　　Liu HongDui1， Gao JunAn2， Wei MingXiu1 　　（1.Shandong Academy of Agricultural Sciences， Jinan 250100， China； 　　2.Shandong Shijichun Foodstuff Co.， Ltd.， Linyi 276400， China） 　　Abstract Through the solid-stated fermentation of hot-rolled peanut meal with double strains of Aspergillus oryzae and Aspergillus niger， four molecular weight distributions （MWD） as 10 ku were obtained after dissolved in water and via membrane separation. Then the tests on hydroxyl radical-scavenging， DPPH radical-scavenging， reducing power and ferrous ion-chelating were carried out with GSH as check. The results showed that the 3～10 ku peptides had the highest antioxidant activity， then the peptides with the MWD 10 ku and in 1～3 ku. The peptides 　　清除率=1-A1-A2A3×100% 　　134 二苯代苦味苯肼（DPPH）自由基的清除试验[3] 向一支10 ml具塞试管中分别加入2 ml一定浓度的发酵多肽溶液和2 ml DPPH-95%乙醇溶液混匀，25℃水浴反应30 min，用分光光度计在波长517 nm下测定吸光值为A1；空白用2 ml蒸馏水代替一定浓度的发酵多肽溶液，对照用2 ml 95%乙醇代替DPPH-95%乙醇溶液，测定值分别为A2、A3（用蒸馏水调“0”点）。DPPH自由基清除率公式为： 　　清除率=1-A1-A2A3×100% 　　135 还原力试验[4] 1 ml一定浓度的发酵多肽溶液或蒸馏水，加入01 mol/L磷酸盐缓冲液（pH 66）和1%铁氰化钾各25 ml，混匀。50℃保温20 min，立即冷却，加入25 ml 10%TCA，混匀。3 000 r/min离心10 min，取上清25 ml加入25 ml H2O和01% FeCl3 05 ml，混匀，静置10 min，在波长700 nm测定吸光值。吸光值越大表示还原力越大。 　　136 亚铁离子螯合[5] 样品1 ml或水1 ml，加入27 ml水，再加入01 ml FeCl2，混匀后加入02 ml菲洛嗪，混匀后静置10 min，562 nm波长下测定吸光值分别为A1、A2。亚铁离子螯合作用测定公式： 　　亚铁离子螯合率=（1-A1A2）×100% 　　2 结果与分析 　　21 羟自由基的清除 　　羟自由基是已知最强的氧化剂，寿命极短，几乎可以和细胞内的所有成分发生反应，造成生物体损伤，导致衰老和疾病。Fenton反应是体内产生羟自由基的主要反应，用比色法测定Fenton反应中产生的羟自由基，再向其中加入羟自由基清除剂多肽，则羟自由基减少，二价铁离子增多，可以通过其与水杨酸-乙醇反应的颜色变化，在510 nm波长下测定吸光值来确定对羟自由基的清除。 　　由图1可以看出，在低浓度时，羟自由基的清除率都不高，在一定范围内，随着多