06 第六章 抗原抗体反应与非标记免疫分析.ppt

第六章 抗原抗体反应与非标记免疫分析 第一节 抗原抗体反应 概念： 是指抗原与相应抗体之间所发生的特异性结合。 体内反应：中和消除异物，维持正常。 体外反应：诊断、鉴别抗原或抗体。 血清学反应： ≠抗原抗体反应 分为两个阶段 第一阶段：特异性结合——不可见 第二阶段：免疫复合物沉积——可见 一、抗原抗体的结合力 抗原和抗体的结合是互补性的特异性结合 不形成牢固的共价键，通过非共价键结合 这种弱的结合力涉及几种分子间的作用力 *1．静电引力 ：相反电荷的基团之间。距离越近，作用力越强。 *2．范德华引力：电子云产生。 *3．氢键结合力：氢原子间。 *4．疏水作用：疏水基团排水积聚的力。 最强的抗原抗体反应力。 二、抗原抗体的亲和性和亲和力 亲和性是抗体分子上一个抗原结合点与对应的抗原决定簇之间的相适应性而存在着的引力，这是抗原与抗体之间固有的结合力。 抗体亲合力是指反应系统中复杂抗原与相应抗体之间的结合能力。多价优势。 亲和力与亲和性、抗体的结合价和抗原的有效决定簇数目相关。 亲和力越大，抗原抗体结合越牢固。 三、亲水胶体转化为疏水胶体 血清学反应条件下，抗原抗体均带负电荷， 使极化的水分子在其周围形成水化层，成为亲水胶体。 当抗原与抗体结合后，表面电荷减少，水化层变薄；而且由于抗原抗体复合物形成后，与水接触的表面积减少，由亲水胶体转化为疏水胶体。 在电解质作用下，各疏水胶体之间靠拢，形成可见的抗原抗体复合物。 第二节 抗原抗体反应的特点 1. 特异性 2. 比例性 3. 可逆性 三、可逆性 概念：是指抗原与抗体复合物在一定条件下可解离为游离抗原与抗体的特性。解离后抗原抗体仍保持原有特性。 一定条件：低pH、高浓度盐等。 常用于解离抗原抗体复合物的物质有： 3mol/L硫氰化钾、pH2.4 0.1mol/L甘氨酸、 7mol/L尿素等。 四、影响抗原抗体反应的因素 （一）反应物自身因素 *抗原： 1. 理化特性 2. Ag决定簇数量 3. Ag决定簇种类 *抗体：1. 来源 2. 特异性与亲合力 3. 浓度 来源：来自不同动物的免疫血清，其反应性有差异。家兔等大多数动物的免疫血清具有较宽的等价带，通常在抗原过量时才易出现可溶性免疫复合物；马等大动物和人的免疫血清等价带较窄，少量的抗原或抗体过剩，均可形成可溶性免疫复合物；家禽免疫血清不能结合哺乳动物的补体，并且在高盐浓度（80g/L） NaCl溶液中沉淀现象明显。 单克隆抗体一般不适用于沉淀反应或凝集反应。 （二）环境条件： *电解质：0.85% NaCl *酸碱度：pH 6～9 *温度：15～40 ℃ *酸凝集：当pH为3左右时，接近细菌Ag的等电点，可出现非特异性凝集。 抗原 表位，抗原结合位点，抗原决定簇（epitope） 1、单克隆抗体的特点 特异性强，具有抗原结合位点的专一性。（不是抗原的专一性！） 因结合位点的单一性，有时不易捕捉抗原，一株单克隆抗体与抗原不易产生凝集反应或沉淀反应。 2、多克隆抗体的特点 多抗是单抗的混合物，因此多抗的性质是一个群体综合的性质。 特异性一般比单抗差 因为由不同性质的抗体组成，只要其中含交叉反应的抗体，多抗就有交叉反应，所以多抗更容易有交叉反应。 比单抗更容易捕捉抗原。因为含有抗不同表位的抗体，多种抗体都可与抗原结合。 二、抗体的制备 1、单克隆抗体的制备 无法采用生物化学的方法从多抗中分离 必须采用细胞杂交的方法来制备 能否筛选到理想的单克隆抗体有技术问 题也有机遇问题 制备单克隆抗体的基本原理： 致敏的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 （myeloma） （能够分泌特异性的抗体 ， （不能分泌特异性的抗体， 不能在体外长期生存 ） 但能在体外长期生存） 阳性杂交瘤细胞 (hybridoma) （既能分泌特异性抗体， 又能够在体外长期生