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桂花多糖提取及含量测定方法研究 　　摘 要：目的：利用溶剂法从桂花中提取出多糖，并对其含量进行测定。方法：使用乙醇对桂花进行脱脂处理，继用热水提取，醇析后得粗多糖，使用三氯乙酸除去蛋白质得精制多糖。利用多糖类化学成分在硫酸作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，后者和苯酚缩合成有色化合物的特性，以葡萄糖作为标准品，采用苯酚-硫酸法，在紫外分光光度计490 nm处其测定吸光度，绘制标准曲线。取适量精制多糖，按测定标准曲线同样方法测其吸光度值，根据公式计算出桂花的多糖含量。结果：采用苯酚-硫酸法对多糖的含量进行了测定，测得平均结果为34%。结论：水提醇沉法制得桂花粗多糖；TLA法除去蛋白质得精制多糖。苯酚-硫酸法对其多糖含量进行测定，结果令人满意。 　　关键词：桂花 多糖 提取分离 　　中图分类号：R284 文献标识码：A 文章编号：1672-3791（2013）01（c）-0087-01 　　1 仪器试剂 　　1.1 仪器 　　RE-52A 旋转蒸发仪器 上海亚荣生化仪器厂 　　SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵 郑州长城科工贸有限公司 　　UV-757CRT型紫外分光光度计 上海精密科学仪器有限公司 　　KDM型调温电热套 鄄城华鲁电热仪器有限公司 　　1.2 试剂 　　分析醇95%、固体氢氧化钠，无水乙醇、丙酮、三氯乙酸、苯酚、铝片、硫酸、葡萄糖、桂花、（以上试剂为分析纯） 　　2 实验方法 　　2.1 桂花多糖的粗提取 　　2.1.1 溶剂提取法 　　从植物中提取多糖的常用方法是溶剂提取法。用水作溶剂时，可以用热水浸煮和冷水浸提提取多糖。或利用高浓度乙醇沉淀提纯不溶于高浓度乙醇的多糖；还可利用混合溶剂提取法对植物中不同的多糖进行分离。 　　2.1.2 多糖粗提过程 　　三份桂花等量干燥品，加95%乙醇8、6、6倍量分别回流提取3 h、3 h、2 h，药渣置通风处晾干，热水浴（90℃～100℃）10、8、8倍量依次提取3.5 h、2.5 h、2 h，过滤，合并滤液，浓缩至1/3，调含醇量至80%，静置过夜，抽滤得沉淀，依次用无水乙醇、丙酮洗涤，得粗多糖。 　　2.2 桂花多糖的精制 　　2.2.1 脱除蛋白质 　　本实验采用三氯乙酸法（TLA）。此法的不足是会引起某些多糖的降解。 　　2.2.2 脱色 　　一般可用弱碱性树脂DEAE纤维素吸附色素，若被DEAE纤维素吸附可进行氧化脱色。 　　2.2.3 多糖的精制过程 　　取粗多糖加水溶解至100 ml，加入等体积30%三氯乙酸溶液脱蛋白，静置2 h，离心，上清液用0.01 mol/L氢氧化钠调pH=7，溶液减压浓缩至适当体积，用95%乙醇调含醇量至80%，放置，沉淀用无水乙醇，丙酮，无水乙醚依次洗涤，真空干燥，得除蛋白精制多糖。 　　2.4 桂花多糖的含量测定 　　2.4.1 苯酚-硫酸法原理 　　多糖或寡糖被浓硫酸在适当高温下水解，产生单糖分子，并脱水成糠醛衍生物，衍生物在强酸条件下与苯酚起显色反应，生成橙黄色物质，在波长490 nm处和一定浓度范围内，其吸光度A值与糖浓度C呈线性关系，从而可用比色法测定含量。 　　2.4.2 标准溶液的配制 　　精密称取105 ℃下干燥至恒重的葡萄糖适量，配得试验浓度为0.08 mg/ml的标准溶液。 　　2.4.3 供试品贮备液的配制 　　精密称取干燥的精制样品适量，配得试验浓度为0.08 mg/ml的待测溶液。 　　2.5 测定条件选择 　　2.5.1 苯酚及硫酸用量选择 　　分别吸取供试品液和对照品液测其A值，从苯酚液加入量达到某一值开始，A值基本保持不变，说明苯酚液量达到该值以上时，反应都能完成。另取根据A的稳定性，计算硫酸的最佳加入体积。 　　3 实验结果 　　3.1 多糖粗提 　　称取三份等量的桂花药品标记为1、2、3号，以不同的条件进行回流。得三份滤渣，称三份重量。 　　1号8.7900 g。 　　2号9.2158 g。 　　3号9.7766 g。 　　将三份药品以不同的条件提取，得三份滤液合并三份滤液282 ml。浓缩至1/3，即30 ml。浓缩后，用80%乙醇沉淀出多糖，过滤得粗品4.0732 g。 　　3.2 活性炭脱色 　　使用活性炭粉末趁热过滤。结果表明，活性炭对桑椹多糖的脱色效果不明显。 　　3.3 多糖精制 　　用三氯乙酸离心除去蛋白质后，得上清液约为172 ml。用浓度0.01 mol/L氢氧化钠调溶液至中性。浓缩后，以80%乙醇沉淀出多糖，过滤得精品3.2139 g。 　　3.6 标准溶液的配制 　　对比试验证明，浓度0.08 mg/ml的标准溶液，在紫外分光光度计490 nm处，吸光度值线性效果最好。