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非典型分支杆菌分类鉴定方法研究进展 　　摘要：非典型分支杆菌与结核分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis）复合群、麻风分支杆菌（M. leprae）同属于分支杆菌属（Mycobacterium）。随着对结核杆菌的深入研究，非典型分支杆菌也逐渐引起了人们的关注。为了对非典型分支杆菌进行系统的了解和分类鉴定，就国内外常用的分类鉴定方法进行了综述。 　　关键词：非典型分支杆菌；结核分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis）；分类；鉴定 　　中图分类号：R378.91；C34 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）13-2977-03 　　非典型分支杆菌是指除了结核分支杆菌（Mycobacterium tuberculosis）复合群和麻风分支杆菌（M. leprae）之外的其他分支杆菌，包括偶发分支杆菌（M. fortuitum）、鸟分支杆菌（M. avium）、堪萨斯分支杆菌（M. kanasii）等30多种分支杆菌。非典型分支杆菌生长缓慢，具有一定的致病性，临床表征与结核分支杆菌相似，容易造成误诊。因此，对非典型分支杆菌的分类鉴定就显得尤为重要。本研究拟对临床中常用的分类鉴定方法进行综述，旨在为更深入的研究提供参考。 　　1 传统分类方法 　　培养分支杆菌常用的培养基有固体培养基，如改良罗氏培养基、匡氏琼脂PNB培养基和Middle brook 7H10、7H11琼脂培养基，在固体培养基中通过观察菌落形态和生长情况鉴定分支杆菌；液体培养基包括Sauton培养基和Middle brook 7H9等，细菌充分接触营养物质时易大量获得细菌，但缺点是易污染，需先进行涂片处理才能观察菌落形态。2008年Wang等[1]检查一位患者咽喉部病变时，经过组织切片和涂片后观察到侵染细菌与鸟分支杆菌复合群相一致。2010年Sajduda等[2]应用PRA（PCR restriction analysis）和传统分离方法鉴定64株分支杆菌，结果表明PRA优于传统方法和特殊DNA测序方法。Guarin等[3]在研究区分龟亚科分支杆菌-脓肿分支杆菌复合群时，对传统分类方法、高效液相色谱分析方法和实时PCR方法进行了比较试验。由于传统鉴定方法耗时长、对操作要求十分严格、培养物易受外界环境污染，所以在实际工作中不易被采用。高效液相色谱法虽然可被广泛应用于非结核性分支杆菌的分类鉴定，但是该方法不能将龟亚科分支杆菌-脓肿分支杆菌复合群里的???员区分开。相对前两种方法，采用实时PCR方法更为快捷省时、操作简单，大大提高了工作效率。 　　2 全自动分支杆菌快速生长培养仪检测方法 　　20世纪70年代末，BD公司研制的BACTEC 460-TB成为全球第一台专业的全自动分支杆菌培养鉴定仪，该系统培养基以Middle brook 7H12为基础，在培养基中加入标记14C的棕榈酸，因此也称为放射性同位素液体培养法。张敦熔[4]在Middle brook系列培养基中加入NAP及其他选择性抑制剂，将培养出来的细菌经过分析仪检测能够快速鉴定出结核与非结核分支杆菌，该技术解决了传统培养方法耗时费力的缺点，使细菌快速培养成为现实。Kontos等[5]应用全自动分支杆菌快速生长培养仪BACTEC MGIT960和PCR-RFLP相结合的方法检测从临床样本中分离到的分支杆菌，检测结果与常规生化试验检测结果相一致，但在检测的敏感性和时间上明显优于常规检测方法。 　　3 噬菌体分析方法 　　胡忠义等[6]应用分支杆菌噬菌体D29采用噬菌体生物扩增法鉴定结核和非结核分支杆菌，经过37 ℃感染1 h，结果结核分支杆菌生物扩增检测为阳性，非结核分支杆菌检测为阴性。吕斌等[7]应用基因工程技术构建可表达荧光素酶的结核分支杆菌重组噬菌体。由于噬菌体具有特异性强、灵敏度高的特点，且不同的分支杆菌发光水平不同，因此重组噬菌体分析方法是一种鉴别结核和非结核分支杆菌的有效方法。 　　4 聚合酶链式反应技术 　　聚合酶链式反应（PCR）技术已广泛应用于分子生物学领域。由于PCR技术具有快速、灵敏度高、操作简单等优点，在分支杆菌鉴定方面也是一种常用的鉴定方法。李国利等[8]利用双重PCR技术寻找结核与非结核分支杆菌之间的特异性条带，旨在快速鉴定结核与非结核分支杆菌。侯瑞生等[9]利用多重PCR体系将临床病例标本和标准菌株进行检测比较，结果显示对病例标本和标准菌株的检测灵敏度达到94.6%，特异性达到100.0%。吴雪琼等[10]利用不同细菌的单链DNA构象不同的特点，建立了PCR-SSCP单链构象多态性聚合酶链式反应体系，用以区别结核与非结核分支杆菌。Yamada-Noda等[11]根据dnaJ基因建立PCR反应体系。结