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花椒子不同提取物体外抑菌效果 　　摘要：为研究花椒（Zanthoxylum bungeanum Maxin）子提取物的体外抑菌作用，用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、无水乙醇、蒸馏水5种试剂从花椒子中提取其活性成分进行抑菌试验。结果表明，花椒子的抑菌活性部位是乙酸乙酯和水的提取物，其中乙酸乙酯提取物的抑菌作用较强，对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）分别为12.500 mg/mL和25.000 mg/mL，对大肠杆菌的最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为25.000 mg/mL和50.000 mg/mL。试验表明花椒子提取物在体外对细菌有一定的抑制作用。 　　关键词：花椒（Zanthoxylum bungeanum Maxin）子；提取物；抑菌效果 　　中图分类号：S482.29 文献标识码： A 文章编号：0439-8114（2013）03-0578-02 　　花椒（Zanthoxylum bungeanum Maxin）属芸香科多年生灌木或小乔木，主要分布在四川、山西、山东及秦岭以南等地区[1]。截至2009年底，四川省花椒种植面积为8.04 hm2，总产量21 000 t，产值5.7亿元。四川汉源县是花椒的著名产地，汉源花椒以皮厚肉丰、色艳味浓而闻名全国，有“贡椒”之称[2]。花椒子是花椒果皮生产中的主要副产物，但长期以来一直未被利用，在产地大量的花椒子被当作燃料烧掉或作为肥料，甚至被当作废物丢弃。 　　花椒子黑色、有光泽，内含丰富的油脂和蛋白质，占花椒总产量的60%～70%。花椒和花椒子均可以作为药材，花椒子在中药中被称为椒目，该药味苦、辛，性寒，有小毒，具有利水、平喘之功；主治水肿胀满、痰饮喘逆等症[3，4]。目前，对花椒的研究主要集中在根、叶、子、果皮的化学成分分析，生物药理活性及花椒的加工应用[5]等方面，而对花椒子的抑菌作用鲜有研究。本试验采用管碟法，研究花椒子提取物对常见的几种病原菌的抑制作用，为花椒子的进一步开发利用提供科学依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　花椒子2011年采自四川汉源县，经四川农业大学动物医学院药学系范巧佳副教授鉴定为正品。 　　1.2 供试菌种 　　大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、沙门氏菌（Salmonella）由四川农业大学药学实验室提供。 　　1.3 材料及试剂 　　材料包含索氏提取器、旋转蒸发仪、恒温培养箱、培养皿、超净工作台、灭菌锅、微量加样器、钢管。试剂石油醚（b.p.60～90 ℃）、乙酸乙酯、正丁醇、无水乙醇均为分析纯。 　　1.4 方法 　　1.4.1 花椒子不同提取物的制备 取花椒子粉末10 g，加90 mL石油醚索氏法提取3 h，提取液浓缩，得石油醚提取液；残渣再用乙酸乙酯90 mL提取3 h，浓缩得乙酸乙酯提取液；药渣再用正丁醇90 mL提取3 h，浓缩得正丁醇提取液；药渣晾干再用80 mL无水乙醇提取3 h，提取液浓缩得无水乙醇提取液；药渣晾干再用80 mL蒸馏水在80 ℃水浴提取4 h，过滤得水提液。 　　1.4.2 细菌的活化及菌悬液的配制 将供试菌种接入相对应的试管斜面培养基上，将供试菌种活化，细菌置37 ℃恒温培养箱内培养18～24 h，在无菌操作的条件下，取培养活化好的菌株，用接种环挑取少量菌体，用无菌生理盐水配制成菌体悬浮液，使菌悬液浓度达到106～107 CFU/mL。 　　1.4.3 体外抑菌试验 体外抑菌试验采用管碟法进行[6]。用无菌棉签蘸取浓度为106～107 CFU/mL的细菌稀释液，涂布于普通营养琼脂平板上，用无菌镊子将钢管均匀摆放平板上，静置10～15 min后滴加花椒子提取液，加至液面与钢管表面平行即可。将平板37 ℃培养18～24 h后，用游标卡尺测量抑菌圈大小。分别用相应试剂做对照。 　　1.4.4 试验结果判定标准 试验结果判定标准：抑菌圈直径大于20 mm为高度敏感，10～19 mm为中度敏感，小于10 mm为低度敏感[7]。 　　1.4.5 最小抑菌浓度（MIC）的测定 采用试管二倍稀释法[8]。将抑菌效果最好的提取原液用相应溶剂倍比稀释，依次配成浓度为50.000、25.000、12.500、6.250、3.125、1.563 mg/mL 6个浓度的肉汤培养基试管，向各管中添加菌悬液50 μL，置于37 ℃条件下恒温培养。18～24 h 后，观察记录各试管是否长菌及生长情况。每个浓度梯度做3组平行试验，不长菌的最小浓度为该样品的最小抑菌浓度。以相应试剂做对照试验。 　　1.4.6 最小杀菌浓度（MBC）的测定 在最小抑菌浓度的基础上，分别将无细菌生长试管的肉汤培养基划线接种于