第八章 体蛋白质检验.ppt

【临床意义】 1.诊断肝癌 AFP被认为是原发性肝癌的特异性的肿瘤标志物。80％以上原发性肝癌患者血清中AFP含量明显增高，目前在中国、非洲等许多国家都将AFP作为肝癌的筛查指标 2.其它肿瘤 AFP含量升高还见于胃癌、肺癌、胰腺癌等肿瘤 3.其他疾病 病毒性肝炎、肝硬化等情况下，血清AFP水平也可升高，但95％以上肝硬化患者血清AFP＜200μg/L 4.肝癌预后判断 AFP＞500μg/L，胆红素＞34μmol/L的病人预后差，存活期时间短；血清AFP急剧升高提示肝癌转移；术后AFP＞200μg/L提示有残存癌体或有转移 5.产前诊断　羊水AFP含量测定可用于胎儿产前监测，当羊水AFP高于正常时，提示胎儿畸形或死胎；85％脊柱裂及无脑儿的母体在妊娠16～18周时血液AFP升高，测定母体的AFP有诊断价值，但要和临床信息相结合，以免出现假阳性的错误 甲胎蛋白 急性时相反应与急性时相反应蛋白 在急性炎症、组织损伤、心肌梗死、烧伤等急性疾病时，血浆中许多蛋白质浓度会发生明显改变，有些蛋白质浓度升高，有些蛋白质浓度降低，随着病情的好转，这些蛋白质又逐渐恢复至正常。这种现象称为急性时相反应(acute phase reaction，APR)，而这些浓度发生变化的蛋白质则称为急性时相反应蛋白(acute phase protein，APP)。APR是机体防御功能的一部分，APP浓度变化的幅度与以上病理状态的严重程度以及时间进程有关，但缺乏特异性 疾病时血浆蛋白质的变化 血浆蛋白质概述 疾病时血浆蛋白质的变化 血浆蛋白质 急性肝炎 肝硬化 选择性蛋白质丢失 风湿病 妊娠期及高雌激素血症 前清蛋白（PA） ↓ ↓ ↓ N 稍↓ 清蛋白（Alb） N或↓ ↓ ↓ N 稍↓ 铜蓝蛋白（CER） — N或 ↑ — — ↑↑ 转铁蛋白 (TRF) — ↓ ↓ — ↑↑ 结合珠蛋白（Hp） ↓ N或 ↓ — ↑ — α1-酸性糖蛋白（α1-AG） N ↓ ↓ ↑ 稍↓ α1-抗胰蛋白酶（α1-AT） ↑ ↑↑ ↓ — ↑↑ α2-巨球蛋白（α2-MG） — ↑ ↑↑ — — α- 脂蛋白(α-LP) — ↓ — — ↑ β- 脂蛋白（β-LP） — — ↑↑ — — C3 — N 或↓ — ↑ — 纤维蛋白原（Fib） — N — — ↑↑ IgG — ↑ ↓ ↑ 稍↓ IgA — ↑↑ ↓ ↑ — IgM ↑ N 或↑ ↑ ↑ — C-反应蛋白（CRP） — N — — — 几种疾病时血浆蛋白质的变化 注：↑为升高，↑↑为明显升高，↓为降低，↓↓为明显降低， N为正常，—为缺失 血浆蛋白质概述 血清蛋白质测定 脑脊液蛋白质测定 体液蛋白质电泳分析 尿液蛋白质测定 体液蛋白质检验 血清蛋白质的测定 血清总蛋白测定 1.凯氏定氮法 1883年由Kjeldahl首创，根据蛋白质含氮量比较恒定（约占16%）这一元素组成特点，通过测定样品中氮量来换算蛋白质的含量。该法结果准确，精密度高，是TP测定的参考方法，但由于操作复杂、用时长，影响因素较多，目前多用于蛋白质标准物的定值和常规方法的校准 2.双缩脲法 是目前实验室测定血清TP的首选方法。测定原理是蛋白质分子的两个肽键(-CO-NH-)在碱性条件下能与Cu2+作用生成紫红色络合物，在540nm波长处有明显吸收峰，吸光度在一定范围内与血清蛋白质的含量成正比，由此计算TP的含量。由于此反应与两分子尿素缩合形成的产物——双缩脲(H2N-CO-NH-CO-NH2)在碱性环境下与Cu2+作用形成紫红色的反应类似，故称为双缩脲反应 体液蛋白质检验 血清总蛋白测定 【参考区间】 健康成年人 65～85g/L 【临床意义】 1.血清TP升高 ①血液浓缩 严重呕吐、腹泻、高热、大量出汗、休克及慢性肾上腺皮质功能减退等疾病时由于水分丢失而使血液浓缩，TP浓度可明显升高 ②合成增加 多见于球蛋白合成增加 2.血清TP降低 ①营养不良 ②合成障碍 ③血液稀释 ④丢失过多 ⑤其它 机体代谢加快、结核、肿瘤等情况时也可能引起TP降低 血清蛋白质的测定 体液蛋白质检验 血清蛋白质的测定 血清清蛋白测定 测定Alb的方法中，目前实验室应用最广的是染料结合法 【原理】在酸性环境下，清蛋白解离带有正电荷，能与带有负电荷的染料结合产生颜色反应，而球蛋白则结合外源性染料很少，因此可以在不分离清蛋白、球蛋白的情况下直接测定血清Alb的含量 与Alb结合的染料有多种，其中溴甲酚绿(bromcresol green, BCG)和溴甲酚紫(bromcresol purple, BCP)是最常用的两种，其中溴甲酚绿(BCG)法是测定血清Alb的推荐方法 BCG结合法 BCP结合法 优点 灵敏度高，与