加减三黄汤对感染大肠杆菌鼠的转化生长因子-α、IL-1β.ppt

加减三黄汤对感染大肠杆菌鼠的转化生长因子-α、IL-1β的影响 学生姓名：张旭光 一、引 言 大肠杆菌是畜禽和人类的重要致病菌，对畜牧业生产和人类健康都有着严重的影响。在临床防治过程中，随着抗生素等抗菌药物的大量使用，大肠杆菌耐药菌株也在不断出新，耐药谱也在不断扩大，有的菌株甚至对临床上刚研制的新型抗生素也表现出极强的耐药性。 中药在临床治疗方面具有独特作用，据报道，中药的活性成分能够明显抑制耐药大肠杆菌的外输系统，对R质粒具有明显的消除作用。 通过对传统中药三黄汤加减配成组方，观察体外抑菌效果，筛选出能够抑制大肠杆菌药物耐药性的抑制剂，来消除其多重耐药性。 本实验先通过在体外对人源大肠杆菌进行临床分离细菌鉴定、分离培养、血清型鉴定和耐药性检测，然后再将分离鉴定的菌株回归到动物体内，对鼠的免疫力和某些免疫因子进行检测，获取有效组方应用于临床，可为该病今后防治提供一定依据。 二、试验材料 2.1 试验药品 黄连、厚朴、苦参、大青叶、穿心莲、黄芩、黄柏、木香、甘草、黄芪、茯苓、均购自张家口医药公司。 2.2 营养肉汤 北京海淀区微生物培养基制品厂生产 2.3 麦糠凯琼脂 北京陆桥技术有限责任公司生产。 2.4 试验菌株 经临床分离生化鉴定的人源大肠杆菌进行血清型鉴定，获得致病性高度耐药的2952(O142+O26+O13)菌株。（北京天坛生物制品检定所鉴定，本室保存）。 2.5 试验动物 30只30日龄小白鼠 购自河北北方学院附属实验牧场。 2.6试剂 碘﹝125I﹞白细胞介素1β放射免疫分析药盒，北京普尔伟业生物科技有限公司；碘﹝125I﹞转化生长因子-α放射免疫分析药盒，北京普尔伟业生物科技有限公司。 三、方 法 3.1 加减三黄汤(MTYS)提取物的制备 中药制剂:黄芩12g、黄连12g、黄柏12g、穿心莲9g、苦参9g、金银花15g、大青叶15g、木香6g、甘草9g、厚朴9g、黄芪9g、茯苓9g。 3.2 最小抑菌浓度（MIC）的测定 采用试管两倍稀释法，对所制备的中药MTYS提取物需先测定其对6号菌株的MIC值，细菌接种量约为109CFU/ML，同时做阴性、阳性对照，每一浓度药液做两个平行，以平均值为最终结果。同时将各培养细菌划线接种于相同中药浓度营养琼脂培养基上，再次观察各菌株的药敏试验结果并记录。 3.3 药物敏感性的测定 采用打孔法测定中药MTYS对上述菌株的抑菌圈直径 3.4 中药抑制剂在机体中使用剂量的确立 3.5 耐药大肠杆菌最佳攻毒量的确定 3.6 加减三黄汤(MTYS)对感染耐药大肠杆菌鼠的分组 取初生鼠30只，常规饲养30d后，随机分为3组：健康组、阳性对照组、MTYS组、每只称重编号，分组饲养。供给全价配合饲料，自由采食和饮水，每天观察鼠的临床表现。在攻毒前每组随机抽取2只，做剖检观察和细菌培养。 3.7 相应测定体重变化脾、肝免疫指数 攻毒喂药后第8d，分别从各组小鼠中空腹称重，统计MTYS对小白鼠增重的影响，然后屠宰，摘取肝、脾称重，计算其免疫器官指数（免疫器官重／宰前空腹活重×100％），即以免疫器官的克数占千克体重的份额（g/kg）表示。各组鸡在感染前和试验结束时分别称重1次，测定胸腺重，根据小鼠的体重变化，计算每组小鼠的平均体重和标准差。 3.8 血液采集与血清制备? 在试验感染后第8d，每组随机抽取5只小鼠，禁食8～12h，心脏采血3ml，在37℃恒温水浴30min，3000r/min离心10min分离血清。做血清因子检测。用移液枪吸取血清，标号待测。IgG、IgA、IgM的含量采用免疫比浊法，以上在日立7150型全自动生化分析仪上测定[9]。均在河北北方学院一附院检验科测定。 3、9 统计结果，确定中药组方疗效 所有实验数据均用t检验软件进行分析，计量资料以±s表示，并进行t 检验分析。 2.1 组菌的抑菌作用方中药对耐药性大肠杆菌 MTYS对2952(O142+O26+O13)菌株的MIC值为62.5g/L。抑菌直径30.9mm为高敏，MTYS无细菌生长。 2.2 中药抑制剂在机体中最佳使用剂量 为了在体内试验时，中药MTYS提取物的浓度能够在体内达到一定的药物浓度，又不影响机体的正常发育，中药MTYS的使用剂量，30日龄以每只鼠0.5ml为宜。 2.3 耐药大肠杆菌最佳攻毒量 耐药性大肠杆菌2952(O142+O26+O13)菌株每只小鼠的接种量以原液的0.2mL（1.6×109CFU）为宜。 表1 各试验组鼠的疗效结果 各组肝指数和脾指数的测定结果 中药抑制剂对感染大肠杆菌鼠的某些生化指标影响 转化生长因子—α对小白鼠免疫功能的影响 白介素1-β对鼠免疫功能的影响 四、讨 论 4.1 组方中药的抑菌作用