叶酸受体靶向性基因载体的合成和细胞转染机理研究 2.ppt

叶酸受体靶向性基因载体的合成和细胞转染机理研究 姓名：曹玮学号：20090311120班级：生物工程091班指导教师：崔韶晖 一、研究背景和意义 二、研究内容 三、研究方案技术路线 报告内容 四、结果与讨论 五、结论 一、研究背景 1.基因治疗 2.新型阳离子脂质体基因载体研究 3.叶酸受体过度表达 叶酸分子结构式 二、研究内容 1.脂质体制备 2.细胞转染效率研究 脂质体制备 氯仿溶解脂材 氮气吹膜 真空干燥 水化 Zeta电位 粒径检测 1.脂质体制备采用吹膜法 三、研究方案技术路线 脂质体 质粒 叶酸 铺板 复合 复合物 三、研究方案技术路线 2.细胞转染效率研究 A1/A2 A3/A4 A5/A6 B1/B2 2000/Final V +N2 Cpa/Final V+N2 1:1/Final V+N2 3:1/Final V +N2 7.2/140+60 7.2/140+60 7.2/140+60 7.2/140+60 B3/B4 B5/B6 C1/C2 C3/C4 6:1/Final V +N2 9:1/Final V +N2 (3:1+N2)+FA(10) (3:1+N2)+FA(20) 7.2/140+60 7.2/140+60 b=120+a=60+20 c=100+a=60+40 C5/C6 D1/D2 D3/D4 D5/D6 (3:1+N2)+FA(30) (3:1+N2)+FA(40) (3:1 +FA(10)) +N2 (3:1 +FA(20)) +N2 d=80+a=60+60 e=60+a=60+80 b=120+20+a=60 c=100+60+a=40 a b c d e 质粒/Final V 3：1/Final V 3：1/Final V 3：1/Final V 3：1/Final V 48/6 00 14.4/240 14.4/200 14.4/160 14.4/120 三、研究方案技术路线 表:1、2：pGFP-N2转染Hep-2方案 四、结果与讨论 结论：随着Cpa/Chol中Chol的浓度增加，电位和粒径均有所增加。 图1：不同比例Cpa/Chol合成的脂质体的粒径和电位的关系 结论：叶酸带负电，能明显降低脂质体电位。 四、结果与讨论 图2：叶酸对于脂质体电位的影响结果 Coefficients 标准误差 t Stat P-value Lower 95% Upper 95% Intercept -5224.743 9313.134 -0.561 0.613 -34863.294 24413.807 x 3.871 1.193 3.243 0.047 0.072 7.669 图3：Zeta电位和粒径与RLU/mg的关系 表3：Zeta电位和粒径与RLU/mg的关系 结论： 1.回归方程：RLU/mg=-5224.74+3.87x，其中x=size*zeta。能说明电位和粒径与RLU/mg具有显著关系。 2.Size和Zeta回归方程：RLU/mg=1270.34+142.03zeta+88.64size。能说明电位对于RLU/mg的影响占主要地位。 四、结果与讨论 图4.不同比例Cpa/Chol携带pGFP-N2转染Hep-2结果 结论：Cpa/Chol=3:1的转染效率最高。 四、结果与讨论 图5.不同叶酸添加量对于pGFP-N2转染Hep-2结果 结论：添加叶酸能明显增加pGFP-N2转染Hep-2的效率，叶酸添加量为0.05μg/ml对转染效率的提升最高。 四、结果与讨论 不同脂质体复合物转染L3质粒表达结果 四、结果与讨论 图6：不同脂质体复合物/pGL3转染Hep-2结果 结论： 1.Cpa/Chol=3:1的脂质体的转染效率最高，此比例为最佳比例。 2.叶酸的复合顺序对脂质体转染效率有一定影响，先复合质粒的转染效率高。 3.不同的叶酸添加量对于转染效率有一定影响，叶酸添加量为0.05μg/ml时对转染效率提升效果最强。 不同脂质体复合物转染L3质粒表达结果 1.胆固醇的添加量跟脂质体的电位和粒径成正比。 2.电位和粒径对于转染效率有影响，且电位的影响效果占主要地位。 3.不同比例的胆固醇对于转染效率有一定影响，Cpa/Chol=3:1的比例为最佳比例。 4.叶酸的添加量对于转染效率有一定影响，叶酸的添加量为0.05μg/ml为最佳值。 5.叶酸的添加顺序对于转染效率有一定影响， 后复合叶酸的效果最好。 五、总结 * *