免疫抑制剂对急性一氧化碳中毒小鼠脑损伤的治疗作用(最终版).ppt

环磷酰胺对急性一氧化碳中毒小鼠脑损伤的治疗作用 Effects of cyclophosphane on brain lesion of mice after acute carbon monoxide poisoning 课题内容简介： 立题背景及依据 研究目的、原理与内容 实验的器材、物品 实验过程 实验的结果 课题的主要内容： 关于结果的讨论 结论 创新性分析 参考文献 鸣谢 （一）立题背景及依据 急性一氧化碳中毒迟发性脑病（delayded encephalopathy after acute carbon monoxide poisoning　DEACMP）： 急性CO中毒的病人经过及时治疗（主要为高压氧治疗），多数可以痊愈，但大约有10%~30%的病人于急性中毒恢复后，经过约2~60天的“假愈期”，可出现一系列神经精神症状。并且目前还没有很好的方法治疗。 （一）立题背景及依据 迟发性脑病可能的发病机制： 缺血缺氧机制 细胞毒性损伤机制 再灌注损伤和氧自由基损伤机制 细胞凋亡及相关基因表达的致病机制 自身免疫机制－现今DEACMP的免疫机制越来越受到人们的重视。临床上有许多脱髓鞘疾病与免疫有关，而DEACMP病理表现主要为大脑白质区广泛脱髓鞘，因此有神经免疫学家提出这种病理改变可能由免疫异常所致。 （一）立题背景及依据 国内外文献相关证据： 该病患者血中IgG、IgM增高，总T细胞（Tt）、辅助性T细胞（Th），自然杀伤（NK）细胞，Th/Ts比值下降，而IgA、抑制性T细胞（Ts）正常 DEACMP中出现了免疫因子MHCⅡ和IFN-γ的表达。位置上，它们主要出现在神经元变性坏死部位；时程上，它们的表达有一定的时间差 大鼠脑内检测到巨噬细胞和CD4+T淋巴细胞的浸润，脑中出现IL-1β的迟发性表达 （二）研究目的、方法与内容 免疫抑制剂——环磷酰胺 （二）研究目的、方法与内容 观察指标： 1、整体水平——Morris水迷宫 2、细胞水平——脑海马CA1区锥体细胞损 伤情况 3、分子水平——MHCⅡ与IFN-γ的 表达情况（条件不允许） （三）实验的器材、物品 仪器： 制备一氧化碳：铁架台，圆底烧瓶，烧杯，酒精灯，温度计，分液漏斗，集气瓶，橡皮管，石棉网，胶头滴管，气囊等 配制环磷酰胺：吸量管，洗耳球，试剂瓶 注射：注射器 其他：水迷宫，电子天平等 试剂： 甲酸，浓硫酸，环磷酰胺，生理盐水 实验动物： 昆明小鼠 （四）实验过程——预实验 １、CO的制备 一些实验器材难寻，只好自己动手制作 （四）实验过程——预实验 １、CO的制备 自创装置——一氧化碳恒压集气瓶 （四）实验过程——预实验 2、预实验阶段鼠分组： （四）实验过程——预实验 3、水迷宫实验的摸索 小鼠不上岸或上岸时间短： 1、水温——24℃ 2、训练不够 （四）实验过程——预实验 （四）实验过程——预实验 4、脑组织切片 样本量偏大 海马位置的确定，脑组织如何切 变性、坏死与凋亡细胞的鉴定 （四）实验过程——预实验 （四）实验过程——正式实验 1、预实验总结 确定正式实验CO剂量为每只小鼠170ml/kg 确定正式实验的环磷酰胺梯度为：20mg/kg、40mg/kg、60mg/kg 打药：针头消毒，药物低温保存… （四）实验过程——正式实验 2、小鼠的筛选 通过水迷宫测试，淘汰智力水平低的小鼠，最后筛选出60只正式实验小鼠 （四）实验过程——正式实验 3、正式实验小鼠分组 （四）实验过程——正式实验 4、结果测定 于中毒后3d、5d、7d测试小鼠水迷宫成绩 中毒后第八天断头取脑，HE染色切片，观察海马CA1区锥体细胞形态，细胞计数 （五）实验的结果 1、水迷宫成绩 三次水迷宫成绩如图所示 用配对方差分析分析第一次和最后一次的成绩，CO中毒组和治疗组有统计学意义。 （五）实验结果 凋亡细胞/正常细胞=T 六组分别是：T=0.1、0.04、0.08、0.05、0.003、0.02 （六）关于结果的讨论 从各组的数据可以看出，第一组模型建立成功，细胞凋亡最多；二、四组治疗效果明显；第三组效果不明显，可能的原因是由于样本量较少；第五、六组的空白实验神经元细胞凋谢最少，水迷宫成绩最好。 （七）结论 环磷酰胺对CO中毒引起脑损伤有明显的保护作用 更加细致的量效关系还需大量实验证明。 （八）创新性分析 1、！CO中毒引起的脑组织损伤机制并未明确，尚无特效疗法！ （八）创新性分析 （八）创新性分析 2、建模方法的创新 以往采用CO流式吸入染毒的方法建立急性CO中毒致迟发性神经原死亡、记忆损害的模型。通过阅读必威体育精装版文献并结合预实验结果，我们采用CO腹腔注射的方法建立的小鼠模型，方法简单，容易操作 （九