解读酶联免疫法检测乙肝血清学五项的影响因素文档.docVIP

解读酶联免疫法检测乙肝血清学五项的影响因素[关键词]乙肝五项；酶联免疫；影响因素。酶联免疫(EILSA)是目前检验科常用的免疫学检测方法，其操作简单，无须特殊设备，普遍适用各级医院。正因如此该检测方法中手工操作占有比例较大，同时因为影响因素诸多，结论大多又属定性诊断，往往成为各级医院检验科医患纠纷的焦点。所以了解影响其结果的因素，避免假阴性或假阳性结果的产生，减少差错事故的发生是极其必要的。本文即是通过分析酶联免疫法检测乙肝五项的影响因素来影射ELISA的质量保证的。本实验室采用上海科华试剂有限公司出品的乙肝血清学诊断试剂盒，包括：乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（hepatitis B surface antibody,抗-HBs）、乙型肝炎e抗原(hepatitis B “e” antigen,HBeAg)、乙型肝炎e抗体(hepatitis B “e” antibody,抗-HBe)、乙型肝炎核心抗体（hepatitis B core antibody，抗-HBc）；手工进行排板，加入各种试剂，控制温育时间，洗板，拍板，终止等；结果则利用科华酶标仪专用控制软件联机控制MK3型酶标仪进行判读并加以审核后发出报告单。首先，我们需正确配置与测试相关的仪器，如：科华酶标仪联机控制软件的各项参数，包括数据传输、受试标本信息输入选项、化验单的正常参考范围、备注部分、HBsAg质控品的设置、各检测项目的计算公式及有效判读条件等；其次是维护和校准仪器，如：MK3酶标仪的滤光片、灯泡及各反射镜、进板轨道等，保证仪器处在较好的待机状态。另外，作为操作人员还需熟练掌握乙肝五项的标准操作规程（SOP），端正工作态度，认真细致；遇事有条不紊，沉着冷静。以上是保证检测准确的先决条件，是本室测试人员务必达到的基本要求。为了便于大家交流领会，下面将以本实验室乙肝五项检测操作次第为序进行讲解。(一)标本采集及其处理用生化管静脉采血3-4ml，空腹为佳。输血、输液和/或标本脂浊、自身溶血等将会对检测结果造成影响。输血后的受检者血液环境改变较大，可能引入某些原来不存在抗原或抗体类物质；输液则直接对血液造成内稀释，导致某些检测指标低度减低或引入干扰药物等成分；脂浊对检测结果的干扰主要是乳糜微粒增多所引起，对ELISA检测血清标志物的影响主要考虑脂浊造成血清粘度大，使分子运动速度减慢，减少抗原抗体结合的机率或由于乳糜微粒产生屏蔽效应而对测定结果产生负干扰；溶血会对乙型肝炎表面抗原的检测产生影响。某检验科采用对比观察的方法随机检验了113名肝功查体者，对比溶血前、后HbsAg的阳性率，结果发现溶血后阳性率比溶血前提高了22.13%。如此结果解释为溶血血清具有过氧化酶活性，其作用效应与辣根过氧化物酶（HRP）类似，能与预包被抗体（Ab）结合。一步法洗涤步骤往往难被完全洗脱，残留的过氧化酶催化底物四甲基联苯胺（TMB）产生假阳性，成为ELISA非特异性显色的来源。当实验室人员收到标本后应认真核对申请单受检者信息、检验项目等与采取标本管是否一一对应、标本量是否充足，对不符合要求的标本和申请单要拒收，然后正确编号次第放入试管架。待标本收集编排结束后待检标本要及时分离血清，一般从采取标本到分离最好控制在3小时以内。对于溶血和脂血标本需酌情考虑是否予以检测，若安排检测必须注明标本状况，如：“标本溶血”或“标本乳糜”。对不能及时检测的标本要妥善保存于4℃冰箱，并做好原始记录，标本管上最好标上待检者姓名、日期。留检的标本应提早安排检测，4℃放置最好不超过5天，如果冷藏贮存可延长至14天左右。从冰箱取出的标本测试前要平衡至室温，对冰冻的样品要复融好，充分混匀后再行检测。标本的采集与处理虽然不是影响检测结果准确性的主要因素，但是有时候又是决定性的，如输血后或输液中采集的标本结果并不能代表受检者自身的境况，往往使得不同时间、单位检测结果出入较大，造成不必要的纠纷。紧急和/或特殊情况需要请检的此类标本应当加以特别说明。为了避免纠纷需与临床标本采集人员密切配合，做好标本采集前的质量控制。另外，还有一些不易察觉的影响因素“非人力所及”。1)类风湿因子的干扰。在乙肝两对半的检测中，它影响e抗原的检测，造成假阳性反应。2)钩状效应（hook effect），即随着被测物浓度增高反而显色减弱甚至不显色，造成假阴性结果。在ELISA中，只有酶抗体和待测抗原形成的复合物结合到固相抗体上后才 能产生检测信号。由于因相抗体只能结合一定量的抗原，在抗原浓度过高的情况下，酶标抗体被过量的抗原所饱和，不能与固相抗体结合而被洗掉，从而导致假阴性，即钩状效应。 3)基因突变。HBV的外衣壳沿有前S抗原（Pres），H