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槲寄生有效成分的研究与开发利用 l0ChineseMedicalResearchamp;Clinical,August,2005,Vo 槲寄生有效成分的研究与开发利用 李丽琴张瑞华徐建富陈乐责 中图分类号:R28文献标识码:A文章编号:1726—4855(2,005)08—00O8—03 槲寄生是一种半寄生植物,通常寄生于落叶树.如:梨 树,榆树,桦树,苹果树,槲树,枫杨,枫香等树上,属于桑寄生 科.全世界槲寄生共有100种,其中20种分布于亚洲,中国 分布有11种,主要分布于东北,华北地区,其干燥带叶茎枝 含多种有效成分,其提取物具有广泛的药理活性.在欧洲, 槲寄生提取物治疗癌症已有70年历史,目前其提取物已经 商品化,诸如出现了Helixor~,Plenosol@,Iscador~等抗癌药 物.】.在远东,槲寄生可以做成茶或熬成汤药用来治疗腰 痛,高血压,肿瘤等J.还有报道槲寄生甲醇一水溶液提取 物可以通过皮下,皮内,静脉给药,也可做成胶囊或茶食用 或饮用,治疗癌,关节炎,心血管病0J.我国早在2300年前 的《神农本草经》即出现了有关槲寄生药用的记载.槲寄生 能祛风湿,补肝肾,强筋骨,安胎,还用于风湿痹痛,腰膝酸 软,胎动不安,鲜叶的乙醇浸液给兔,狗注射,有降压作用. 槲寄生提取物多年来一直被用作肿瘤的辅助治疗药物,许 多国外学者致力于其有效成分的分离提取,并进行药理活 性研究.目前已有许多成分分离出来,在这些成分当中,槲 寄生凝集素是研究较多的一种成分,其他成分还包括槲 寄生毒素】,生物碱[1”】,壳多糖结合蛋白[15.161,多 糖’J,果胶],磷脂成分】,抗氧化物质圳等.我国学者 对槲寄生的研究工作较少,本文就槲寄生多种有效成分的 药理活性和开发利用情况进行综述,以利于对我国丰富的 槲寄生资源进一步的临床开发应用. 1有效成分的分离提取方法 1.1槲寄生凝集素-7]100g植物茎(叶)切成5mm的小 段,用750ml0.5mol/LNaC1在室温浸泡3h,过滤,滤液中加人 (NIl,)SOt至饱和度为70%(6og/100na),静置过夜,10000g离 心10min收集沉淀,将沉淀溶于少量0.5mol/L的NaC1中,作 为粗提取液.经DE一52,酸化的Sepharose4B,1gO—SeDh— rose4B,ConA—Sepharose4B柱层析得到viscumin. 1.2槲寄生毒素100g粉碎的干燥茎和叶,用200ml 4%的乙酸浸泡,匀浆,10000g离心30rain,沉淀对25mmol/L 的乙酸缓冲液(pn=4.8)4透析,透析液作为槲寄生毒素 粗提取液,产率为0.16%.粗提取液经阳离子交换柱CM— SepharoseFF,(Nl-h)SO4沉淀,HPLC(superose12)等分离,得到 有毒馏分,透析,冻干,即为槲寄生毒素. 作者单位:北京药物化学研究所(102205) 作者简介:李丽琴,女,33岁,副研究员,硕士生导师. 研究方向:药物临床前毒理学,毒物分子药理和毒理学,药效和毒效 学. 1.3槲寄生生物碱n切成小段的茎和叶,用2%的乙 酸提取2472h,过滤,滤液冻干,重新溶于PB中,作为粗提 取液.粗提取液用石油醚反复提取,水溶液层用NaHC(h调 pH至8.5,再用氯仿抽提几次,氯仿提取物在负压条件下蒸 发得到生物碱,产率为0.38%,在制备型的TIA~”和硅胶柱上 可进一步分成若干组分. 1.4槲寄生壳多糖结合蛋白”100g叶或幼茎,加人1L 20mmol/L乙酸,匀浆,过滤,于8000g离心10min,倒出上清, 过滤,按每升滤液中加人1.5gCaC12,然后调pH至9.0,放置 2~C约3h,3000g离心10rain去除沉淀,上清用1N乙酸调pH 为3.0,冷室过夜,3000g离心10min,上清用Wlmtman3MM滤 纸过滤,滤液用等体积蒸馏水稀释,上阳离子交换柱,用0. 5mol/LNaC1洗脱结合的蛋白.然后再经Sepharose4B,Fetuin — Sep|mrose4B柱层析去除槲寄生凝集素.含槲寄生壳多糖 结合蛋白的组分再经Chitin亲和柱(C7170)层析,用20retool/ L乙酸解吸附,对水透析,冻干. 1.5槲寄生多糖新鲜植物与缓冲液(抗坏血酸盐一磷 酸缓冲液0.14mol/LpH=7.4)在氩气中加压提取,流出汁液 经Sepharose4B柱层析去除槲寄生凝集素.层析后溶液中加 入PVPP去除酚类化合物,通过离心除去PVPP.再经热处理 (85lOmin)使蛋白变性沉淀,使用玻璃纤维滤纸或滤膜(0. 45~m)去除变性蛋白.在滤液中加人96%乙醇9份,使多糖 物质沉淀,置于448h,沉淀物用96%的乙醇洗3次,溶于 水中,用(6000—8000分子