菌落总数几种检测方法的介绍.doc

菌落总数几种检测方法的介绍 苗丽 主要讲述以下几个问题： 第一：澄清菌落总数概念 第二：国标(GB)和行标(SN)的差异 第三：实验操作中的一些注意事项 第四：菌落总数3M快速方法介绍 一、澄清菌落总数概念 菌落总数是指食品检样经过处理在一定条件下培养后所得1ml（g）检样中所含菌落的总数。我们知道单个细菌我们肉眼是看不到的，但在人为给它们提供一定条件如培养基，适宜的温度、时间、PH、需氧条件等。在这样一个环境中，单个细菌不断分裂、繁殖，最后发展成为我们肉眼可见的菌落，所以我们说菌落总数可以作为判定食品被污染程度的标志，也是对检样进行卫生学评价时的一个重要依据。 二、国标和行标的差异 25ml(g)+225ml稀释液 10ml+90ml稀释液 1ml+9ml稀释液 370C 48h 培养基不同 国标用的培养基是营养琼脂，行标用的培养基是平板计数琼脂，两者成分稍有差别，如下表所示： 营养琼脂 平板计数琼脂 蛋白胨 10 g 胰蛋白胨 5.0g 牛肉膏 3g 酵母浸膏 2.5g 氯化钠 5g 葡萄糖 1.0g 琼脂 15-20g 琼脂 15g 蒸馏水 1000ml 蒸馏水 1000ml 不同的方法要使用不同的培养基，目前这两种培养基都有现成的成品出售，大家可以不必再自己配制。 稀释方法不同 国标做1：10稀释时是将1ml样液加到9ml稀释液中，而行标是将10ml样液加入到90ml稀释液中，同样是1：10稀释，大家应该很容易理解行标的稀释方法应该是更准确（10＋90→1＋9），所以说行标的要求比国标往往要高一些。 计数范围 国标是将30―300个菌落作为合适范围，而行标是将25―250个菌落作为合适范围。 制订行标时之所以将25―250个菌落作为合适范围，主要是参照美国FDA（美国食品和药物管理局）的做法制订的，大家知道，因为美国是发达国家，FDA又是它们的权威机构，所以目前世界上很多国家都是以FDA颁布的一些方法作为标准，当然FDA规定25―250这个范围也是由他们的细菌学家经过反复论证才得出的。 从以上几点可以看出，行标比国标更严谨、更科学、更合理，更接近于国际标准。 三、实验中的注意事项 1、如果有包装的样品，必须要用75％的乙醇在包装开口处擦试后取样，以保证样品不受外包装的污染，取样时要有代表性，尽量取不同部位。 2、用吸管吸取液体时，吸入的液体应先高于所要求的刻度，然后提起吸管使其尖端离开液面再将液体调整至所要求的刻度，不要直接吸到所需刻度，比如说想吸10ml，就只吸到10ml提起直接注到其它器皿中，这样的话很可能你吸的就不够10ml，这里我建议大家用移液器，使用起来比吸管准确，省心。 3、吸取均质好的样品时，吸管插入液面的深度要合适，插得太靠表面，如做肉样时，吸入的可能是脂肪，太靠下，又可能吸的是渣子，所以要插入一个合适的深度，如行标中提到的插入液面下2.5cm左右。 4、加过样品后倾倒培养基的时候，记着将培养基倒入平皿后一定要立即旋转培养基，让样品液和琼脂培养基充分混合，尽可能使长出的菌落均匀，容易计数。 5、制好的样品如果没有立即用，放置时间超过3分种的话，用前尽量再振摇振摇，以保证样品均匀，有代表性。 6、每次试验都要做一个空白对照（即用1ml的稀释液代替样液加到灭菌平皿内），这样可以检验一下咱们实验的无菌环境情况如何。如果空白对照为0，说明咱们的无菌环境包括稀释液，吸管、灭菌平皿等等都是过关的。 7、关于蔓延菌落的预防问题，这里给大家介绍一个方法，就是用夹心法。即在灭菌平皿上先铺上薄薄的一层琼脂，凝固后再加样液，完了之后再倒琼脂，这样的话就可以防止琼脂和平皿之间形成水膜样的蔓延菌落。 8、稀释度的选择要适当。尽量不要因为选择的稀释度太高，而检不出一个菌落，或者因为稀释度太低而导致平板上的菌落都是多不可计，这样的话，要么总是高于计数范围，要么低于计数范围，我们得出的结果就不太准确，也就失去了我们做这个试验的意义。 9、关于有蔓延菌落生长的平板菌落数计算