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monocyte Neutrophil 吞噬细胞 分类 大吞噬细胞（单核巨噬细胞） 实验结果 Neutrophil lymphocyte * * * 实验二 中性粒细胞吞噬功能测定 ——细菌计数法 实验内容 1. 细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能 (小组做) 2. 录相《免疫反击战》 目的与要求 1.了解中性粒细胞生物学特性及其意义。 2.熟悉“细菌计数法测定中性粒细胞吞噬功能”试验的原理、方法及用途。 小吞噬细胞（中性粒细胞） 中性粒细胞来源于骨髓造血干细胞；占白细胞总数的60% ～ 70%； 胞核呈多叶状；胞质内分布着不能被苏木紫、伊红等染色的颗粒； 内含髓过氧化物酶、防御素、溶菌酶、组织蛋白酶、乳铁蛋白、碱性磷酸酶等。 实验原理 血液中的中性粒细胞(即小吞噬细胞)具有吞噬病原微生物等异物微粒的能力。 吞噬过程 将新鲜血液和细菌混合，经合适时间后涂片染色，在油镜下即能观察到中性粒细胞吞噬细菌的情况，计算吞噬率（%）和吞噬指数，辅助判断机体非特异性免疫力。 (1)显微镜、香柏油、小试管、EP管、载玻片、酒精棉球、吸管、水浴箱等。 (2)肝素抗凝试管、瑞氏染液、双蒸水。 (3)菌液制备：白色葡萄球菌18～24小时内汤培养物，经Mc Farland比浊法调整浓度至6～9×109/mL，加热100℃ 15分钟杀死细菌，置4℃保存备用。 实验材料 (1)仔细消毒后，每个班取4～ 5ml静脉血于肝素抗凝管内（轻轻摇匀）。 实验方法 (3)取出EP管，用吸管吹打混匀后，取半滴“全血-白色葡萄球菌混合液”置于洁净载玻片上，用另一载玻片“推”成薄血涂片。 (2) 取2ml抗凝血于EP管内，再加入1ml备好的白色葡萄球菌菌液，充分混匀后，置37℃水浴20min，中途混匀1次。 (4)待血涂片自然凉干后，用瑞氏染液染色。 瑞氏染色 瑞氏染液数滴覆盖血膜——染1min——再加等量的PH6.8 PBS与染液混合，染5~15min （注意勿使染液干涸）——用蒸馏水冲洗（平持玻片，在一端加水，使染料“漂走”）——空气中自然干燥（也可用洗耳球吹干） 结果观察 先寻找中性粒细胞——观察胞质中有无吞噬的细菌。如染色正确，可见细胞核及被吞噬的细菌染成紫色，而中性粒细胞胞浆染成淡红色。 1. 吞噬百分率＝ 100个细胞中吞噬有细菌的细胞数 人吞噬百分率正常参考值：62%~76% 100 × 100% 2. 吞噬指数＝ 100个中性粒细胞吞噬的细菌总数 人吞噬指数正常参考值：1.32~1.72 100 计算吞噬百分率和吞噬指数 * *