植物培养学 复习提纲.doc

中山植物培养课程复习提纲 单细胞分离的方法有哪些。 机械法和酶解法 细胞悬浮培养分为哪两种培养类型。分批培养的细胞如何再进行继代培养？ 类型：分批培养和连续培养。 分批培养的细胞进行继代培养的方法有：将培养物摇匀，静置片刻，用吸管吸去培养及中部的培养物（此处细胞团小，胞质浓厚），也可通过过滤收集到小细胞团进行继代培养。在更换培养基时，弃去底部愈伤组织块或大细胞，只保留小细胞团置瓶内，加入新的培养基。 单细胞培养的方法有哪几种？看护培养法、平板培养法、微室培养法的定义。 方法：看护培养法、平板培养法、微室培养法 看护培养法：指用一块活跃生长的愈伤组织来看护单个细胞，并使其生长和增殖的方法 平板培养法：将单个细胞与融化的琼脂培养基均匀混合后平铺一薄层在培养皿底上的培养法 微室培养法：将单细胞培养在少量的培养基中 平板培养法中植板效率的概念。 已形成细胞团的百分数（即每100个铺在平板上的细胞中有多少个能长出细胞团）。 植物细胞用于悬浮培养体系的生物反应器分类如何？用于固定化体系培养的生物反应器分类如何？ 悬浮细胞培养体系的生物反应器有：机械搅拌式反应器，气体搅拌式及两种形式的组合形式 固定化培养体系的生物反应器：填充床反应器，流化床反应器，膜反应器 举例详细叙述影响药用植物细胞大量培养和次生代谢产物合成的因素有哪些？ 一、培养基组分 ：1、培养基中生长调节剂，植物生长调节剂影响植物的脱分化与再分化，还能影响次生代谢物质的产生。如烟草愈伤组织培养中，培养基中添加IAA（吲哚乙酸），能合成烟碱，而加入2，4-D（2，4-二氯苯氧基乙酸）烟碱合成受阻。 2、磷酸盐浓度等。二、培养条件：光照、温度、PH等影响次生代谢。植物细胞生长PH值最适5-6；植物细胞最佳生产培养温度26℃-28℃。三、代谢调控因子：诱导物、促泌剂、前体、特异性代谢抑制剂等。四、细胞接种量：大于最低细胞接种量（密度）。细胞接种量不宜过大。五、通气状况和气体组成：供氧状态良好。通气量不宜过高。六、两相培养基：细胞生长分裂旺盛时，次生代谢物产量低。加入人工第二固相（活性炭、离子交换树脂等）或液相（十六烷等）培养，将细胞培养在惰性基质中，细胞生长缓慢，可提高次生代谢物质的产量。 原生质体的概念。体细胞杂交的概念。 原生质体：是指用特殊方法脱去植物细胞壁的、裸露的、有生活力的 植物细胞。 体细胞杂交：即原生质体融合，使分离下来的不同亲本的原生质体，在人工控制条件下，像性细胞受精作用那样相互融合成一体。 用于原生质体培养时使用的渗透压稳定剂有哪些？ 渗透压稳定剂是糖系统，包括甘露醇、山梨醇、蔗糖和葡萄糖等。 原生质体培养的培养方法有哪些？原生质体培养时要求的接种培养密度如何？ 培养方法：培养类型有液体培养、固体培养、双层培养和琼脂糖珠培养。 有较高接种密度：一般104-105/ml 详述原生质体融合所采用的方法有哪些？ 1、自发融合：由于去壁的裸细胞具有彼此融合的能力，在制备原生质体的酶解保温处理过程中，相邻的原生质体能彼此融合形成含有多个细胞核的融合体，这种方式就是自发融合。仅限于同一物种内。2、诱发融合：通过诱发剂是两个彼此相邻的原生质体相互融合的过程，称为诱发融合。诱发融合的主要方式有：化学融合方法，物理融合方法。（1）化学融合：采用化学融合剂，促使原生质体相互靠近、粘连融合。常用的化学融合剂主要有PEG、NaNO3等。（PEG与高钙相结合的诱导融合）。（2）物理融合：采用电场等方法使原生质体相互靠近、融合的方法。 植物细胞融合的整个程序如何？ 两种亲本的原生质体分离，用理化因子诱导融合，异核体或杂种细胞的选择，杂种细胞的培养及再生，杂种细胞的鉴定等 体细胞杂种不同于亲本的遗传体征表现在哪里？ 表现在：细胞分裂不稳定，染色体数目不稳定，杂种植株的不育性 种质的概念。植物种质保存的概念。 种质:指亲代通过生殖细胞或体细胞传递给子代的遗传物质 植物种质保存:利用天然或人工创造的适宜环境，使个体中所含有的遗传物质保持其遗传完整性，高活力，能通过繁殖将遗传物质传递下去。 离体保存的意义如何？ 可使一些无性繁殖作物种质资源低温长期保存，避免资源的丢失。节省土地和劳力，方法简单，花费少并能在保存中脱毒。一旦利用可快速繁殖；也利于种质交换。 超低温保存的概念。植物种植保存中最常用的冰冻保护剂是什么？ 超低温保存：也叫冷冻保存，指在-196℃的液氮超低温下使细胞代谢和生长处于基本停止的状态，在适宜条件下可繁殖，再生出新的植株，并保持原来的遗传特性。 所使用的冷冻保护剂：常用的是DMSO 详细叙述超低温保存的基本程序。 超低温保存的基本程序包括预处理、冷冻处理、冷冻贮存、化冻和再培养。1 预处理：（1）材料生长状态和年龄的