大一生化实验8个.docx

一酵母RNA提取分离及组分鉴定实验目的①掌握和学习使用离心机②掌握RNA提取分离方法及其鉴定方法③了解核酸组分实验原理①RNA溶于碱性溶液②加入酸性乙醇可使RNA沉淀③RNA可水解为含氮碱基、戊糖、磷酸实验材料与器材酵母片研钵、25ml试管一支、普通试管三支、烧杯、离心管、玻璃棒、恒温水浴锅、量筒、移液管、分析天平、试管架实验步骤 5片酵母片→加10mlNaoH研磨（25ml试管）→沸水浴30min→离心15min（3000r/min），之后将上清液注入15ml酸性乙醇中，边到边摇，之后将其离心3min，弃上清液，然后用95％乙醇15ml洗涤一次，离心3min，弃上清液得RNA粗制品，加入6ml H2So4，沸水浴加热10min鉴定①嘌呤鉴定：向试管中先加入1mlAgNo3，再加入1ml氨水形成絮状物，最后加入水解液1ml②磷酸鉴定：先加入定磷试剂1ml，再加入水解液并加热溶液变为蓝色结果与分析酵母RNA中含有碱基和磷酸二考马斯亮蓝G250测定蛋白质含量实验目的①掌握分光光度计的使用方法②理解和掌握考马斯亮蓝法测蛋白质含量的操作实验原理 G250游离态呈红色，与蛋白质结合后变蓝色在595nm有最大吸收值实验器材与试剂绿豆芽下胚轴、考马斯亮蓝G250、95%乙醇、85%磷酸、分光光度计、漏斗、滤纸、试管架与试管、微量移液器、研钵、封口膜实验步骤①标准曲线的绘制 C(ug/ml)=118.25*A+0.2799,A=(A1+A2)/2②取新鲜绿豆芽下胚轴0.5g左右，放入研钵中加入5ml蒸馏水研磨至匀浆，再加入5ml水摇匀，过滤至大试管③取三支试管按下表加入溶液，混匀，等2min试剂对照样品1样品2提取液/ml011蒸馏水/ml100考马斯亮蓝/ml555④在λ=595nm处测样品吸光值计算样品含量=(CV)/W ug/g注：V=25ml,W=0.5g左右(自己测的多少是多少)三小麦萌发前后淀粉酶活力的比较实验目的①熟练掌握分光光度计的原理和使用方法；②学习测定淀粉酶活力的方法③了解小麦萌发前后淀粉酶活力的变化实验原理种子中贮藏的糖类主要以淀粉的形式存在，淀粉酶使之分解为麦芽糖，麦芽糖有还原性，能使3,5-二硝基水杨酸还原成棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸，棕色的3-氨基-5-硝基水杨酸可用分光光度计法测定。实验材料与器材分光光度计、恒温水浴锅、移液管、研钵、离心机、恒温箱、离心管、25ml试管、干湿种子若干实验步骤①取干种种子和萌发种子各两粒，分别放入研钵中加10ml蒸馏水研磨至匀浆，在室温下放置10min，其间搅拌两次，过滤至试管，并用蒸馏水定容至10ml，混匀；②取25ml试管4支，按下表加入各试剂空白管标准管干种湿种水/ml0.5000淀粉/ml1.01.01.01.0麦芽糖/ml00.500酶（提取液）/ml000.50.5OD值③将各管混匀，放在25℃水浴中保温3min后立即放入沸水浴中再立即加3,5-二硝基水杨酸溶液2ml，在沸水浴中加热5min，冷至室温加蒸馏水稀释至20ml；④比色，测OD值计算溶液的浓度与吸光度值成正比： C（酶液管中麦芽糖的浓度）=（A酶*c标准）/A标准规定：25℃时3min内水解淀粉释放1mg麦芽糖所需要的酶量为一个酶活力单位，则总活力单位=c酶*V酶；式中，c酶为酶液中麦芽糖的浓度，V酶提取酶液的总体积即10ml四抗坏血酸VC含量的测定实验目的①学习和掌握VC定量测定的原理②理解和掌握滴定法测VC的基本操作实验原理 KIO3+5KI+6HCl→6KCl+3H2o+3I2 3I2+3AsA→3DHA+6HI I2+淀粉→蓝色（判断滴定终点）实验材料与仪器苹果或橘子、研钵、纱布、铁架台、滴定管、天平、吸耳球、移液管、烧杯、三角瓶、胶头滴管、25ml容量瓶、2%HCl、1%KI、0.000167mol/L KIO3、淀粉实验步骤①称5g左右的样品，放置研钵内，加入5ml 2% HCl，研磨成匀浆状，防止暗处30min②用两层纱布过滤于烧杯内（用10mlHCl冲洗过滤），然后将提取液转入25ml容量瓶，用HCl定容，混匀③测定：在三角瓶内加入下列试剂对照：1%KI 0.5ml+淀粉1ml+2滴HCl+蒸馏水8.5ml样品：1%KI 0.5ml+淀粉1ml+2滴HCl+样品5ml+蒸馏水3.5ml④滴定：I用KIO3滴定对照，要一滴一滴加，并摇动三角瓶滴至微蓝色，记录KIO3的用量V1II用KIO3滴定配好的样品，要求同上，记录用量V2计算与分析注：①1ml 0.000167MOl/L KIO3相当于分子量为176g/L干VC的量为0.088mg/ml②B为滴定时所用样品体积5ml③a为样品克数④b为样品液总体积100g样品中VC含量={[（V2-V1）*0.088]/B}*(b/