抗菌药物敏感试验细菌耐药性检测ppt课件.ppt

第四章抗菌药物敏感试验;主 要 内 容;敏感和耐药的概念; 血药浓度与MIC之间的关系; 抗菌药物的治疗浓度与MIC的关系： 若MIC小于治疗浓度， 则为“敏感”（Sensitive , S ），推荐使用。 若MIC大于治疗浓度， 则为“耐药”（ Resistant , R ）； 若MIC介于治疗浓度的上下限之间， 则为“中度耐药”（ Intermediate , I ）或中度敏感;;敏感; 第一节、抗菌药物敏感性试验方法;稀释法 ? 肉汤稀释法（试管稀释法） ? 琼脂稀释法（平板稀释法） 纸片扩散法（纸片法） E-试验 联合药物敏感试验;稀释法的特点;二、纸片扩散法（disc diffusion test) （Kirby-Bauer法） ;; 抑菌圈的大小与MIC： 二者呈负相关，即抑菌圈愈大，MIC愈小。;纸片法药敏试验抑菌圈直径与结果解释的标准; 操作方法 ： 1. 制备M-H琼脂平板，厚度4mm。 2 .制备0.5麦氏比浊管浊度的菌液 （培养16～24h，4~5个菌落）。 3. 菌液均匀涂布于平板。（15分钟接种完毕） 4. 无菌贴标准抗生素纸片于M-H琼脂表面， 5. 经过35℃16～24h孵育。 6. 量取抑菌环直径， 根据CLSI标准， 报告细菌对该抗生素敏感、 耐药、中介。;操作方法 ： 1. 将在约56℃恒温的无菌M-H琼脂倾注直径为90mm 的平板，其厚度 4mm。;2.无菌挑取孵育16～24h的血平板上4~5个菌落。;3. 将菌置于无菌生理盐水中，校正其浊度于0.5麦氏比浊管浊度的菌液。;4.用无菌棉签浸入细菌悬液中，将拭子在试管上壁轻轻挤压以挤去过多的菌液。棉签在三个方向均匀抹琼脂表面（每次转60℃）使菌液均匀分布，最后沿平板内缘涂抹一周。 ;5.盖上平板的盖子，放置培养箱内孵育，放置3~10分钟后贴上标准抗生素纸片。 ;6.用无菌镊子或纸片分配器将抗菌纸片粘贴于M-H琼脂的表面，一旦纸片贴上，不能移动；各抗菌纸片中 心距离应大于24mm，纸片距平板内缘应大于15mm。;7.经过35℃16～24h孵育。;纸片扩散法质量控制;;根据抑菌圈的直径，依照CLSI标准，作出敏感、耐药、和中介的判断。为‘‘ 定性”结果。 CLSI推荐的最简单的药敏试验。;三、E试验法（浓度梯度法）;无菌生长区;;29;30;E test 法特点;用于病原菌尚未确定的急、重症感染的经验治疗,以扩大病原治疗的覆盖面 治疗多种细菌所引起的混合感染 对于某些耐药菌可取得协同抗菌作用 减少或推迟治疗过程中细菌耐药性的产生 避免药物达到毒性剂量。 ;增强作用：两种抗生素联用的效果大于它们单独使用时的效果之和； 20％～25％ 相加作用：它们联用时的效果等于单用两种抗生素效果之和； 60％～70％ 无关作用：两种抗生素联用的效果，仅相当于其中一种具有较强作用的抗生素的效果； 拮抗作用：两种抗生素联用时的效果反而小于它们分别使用时的效果之和。 10％～15％; 两种抗菌药物作用部位不同： β－内酰胺类抗生素（抑制细菌细胞壁合成）与氨基糖苷类抗生素（干扰细菌的代谢）。 增强作用：增加了药物进入细菌细胞 杆菌肽（降低细胞通透性）与氨基糖苷类药物（干扰细菌的代谢）。 拮抗作用：降低了药物进入细菌细胞;棋盘稀释法 利用肉汤稀释法原理，依据两种药物的MIC， 以棋盘设计两种药物不同浓度的组合。 计算抑菌浓度指数（fraction inhaibitory concentration,FIC);棋盘稀释法;抑菌浓度指数（FIC）;A药： 32 16 8 4;药敏试验方法的比较;第二节 结核分枝杆菌的药敏试验  （了解）;四种方法;;分枝杆菌微量直视 快速药敏试验法;培养72h观察结果;第三节 厌氧菌体外药敏试验 （了解）;基本原理和方法与需氧菌相同，只是在培养基、操作环境和培养条件等应根据厌氧菌的特定需要变动。 培养基为布氏血琼脂再加人补充剂 5μg/ml氯化血红素，5％脱纤维羊,1μg/ml Vit K。 厌氧孵育条件 质控菌株为脆弱类杆菌ATCC25285。 ;药敏试验结果的临床价值 ;新的药敏试验方法探索;细菌耐药性的发生过程：;第35章第三节细菌耐药性检测;生物化学技术检测酶的等电点(等电聚焦电泳) 头孢哨噻吩滤纸片法 碘淀粉测定法 分析酶的底物谱及抑制物谱 纸片法和