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《免疫学检测技术及应用》课件
免疫学检测技术及应用;免疫学检测技术应用:
1. 疾病的诊断、治疗效果评价及发病机理探讨:
如:感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反应、自身免疫病、免疫增殖病、移植排斥反应、肿瘤等
2. 免疫分子的定性、定量测定:
如:细胞因子、粘附分子、细胞受体、补体、抗体等; 3. 抗原物质的定性、定量检测:
如:病原微生物及其代谢产物,组织细胞、蛋白质等
4. 免疫细胞的分离、鉴定及功能测定:
如:T细胞及其亚群等;抗原-抗体反应
抗原与相应抗体在体内或体外相遇可发生特异性结合,呈现的某种反应现象。 ;抗原抗体反应有以下几个特点:
1.抗原与抗体结合是特异性结合
表位(抗原)——超变区(抗体)
2.抗原抗体结合是分子表面的非共价键结合
氢键、疏水键、静电引力和范德华力(Van der waal‘s force) 、电子云力的合力。
抗原和抗体可解离,性质不变。 ;
3.抗原抗体反应可分为两个阶段
(1)特异性结合阶段
此阶段需时短,仅需几秒到几分钟,无可见
反应出现
(2)可见反应阶段
需时较长,数分,数小时或数日出现可见现
象,表现为沉淀,凝集,细胞溶解等
4.抗原和抗体结合是否呈现明显可见的反应现
象,与两者的分子比例密切相关 ;抗原抗体反应包括:
沉淀反应
凝集反应
溶解反应
补体结合反应
中和反应
已知抗体 检测未知抗原;
已知抗原 检测未知抗体。;Sensitivity of varior immunoassays;一、沉淀反应(precipitation)
可溶性抗原与相应抗体在电解质存在条件下结合,出现沉淀物的现象。
沉淀反应的试验方法:环状法
絮状法
琼脂中沉淀法
;
琼脂中沉淀反应法:
双向免疫扩散(double immunodiffusion)
单向免疫扩散(single radial
immunodiffusion)
对流免疫电泳(counter
immunoelectrophoresis)
火箭电泳(rocket electrophoresis)
免疫电泳(immunoelectrophoresis) ;
二、凝集反应(agglutination)
颗粒性抗原或吸附于颗粒上的可溶性抗原(或抗体)于相应抗体(或抗原),在电解质存在下出现凝集物的现象。;凝集反应包括:
◆ 直接凝集反应 (direct agglutination)
◆ 间接(被动)凝集反应(indirect/passive
agglutination)
◆ 间接凝集抑制试验(indirect agglutination
inhibition test)
◆ 协同凝集试验(coagglutination test)
◆ 抗球蛋白试验(antiglobulin test,Coomb’s
test)
;三.免疫标记技术
用荧光素、同位素、酶及发光等示踪物质标记抗体(或抗原),与抗原(或抗体)进行反应,通过检测示踪物质,分析被检抗原(或抗体)的存在或含量的方法。
灵敏度:高,1X10-4 ~1X10-5ug抗体/ml
应用:微量物质的定性、定量或定位。
;免疫标记技术的基本类型:
(一)免疫荧光技术(immunofluorescence
technique)
(二)免疫酶技术(immunoenzymatic
technique)
(三)同位素标记技术(isotope labelling
technique)
(四)发光免
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