《免疫学检测技术》课件.ppt

第二十二章 免疫学检测技术 p193 主讲：运晨霞;;一. 体外抗原抗体反应的特征 高度特异性：抗原的表位与抗体的抗原结合点结构互补。 表面化学基团之间的可逆性结合 适宜的抗原抗体浓度和比例 抗原抗体反应的两个阶段;高度专一性的结合;可逆性结合;抗原抗体比例对反应现象的影响;（一）凝集反应 颗粒性抗原（RBC、细菌等）与相应抗体 结合形成肉眼可见凝集物的现象或反应。 1．直接凝集试验 玻片凝集试验：用于定性测抗原。如ABO血型鉴定，细菌的鉴定、分型等。 试管凝集试验：用于定量测抗体，如肥达氏反应。 2．间接凝集试验 如类风湿因子的测定等。 ;（二）沉淀反应 可溶性抗原（血清蛋白、组织浸液等）与 相应抗体结合而形成可见沉淀物的反应。 因该类反应多在半固体琼脂凝胶中进行，故 又称为琼脂扩散试验或免疫扩散。 ;琼脂凝胶;1．单向免疫扩散 用于定量测抗原。 如检测血清免疫球蛋白、C3等含量。 ;2．双向免疫扩散 主要用于定性检测抗原或抗体，抗原组成及两 种抗原相关性分析;3．免疫电泳 其方法是先电泳、后扩散。主要用于抗原成分的分析，亦可用于诊断如骨髓瘤、性联低丙种球蛋白血症等的诊断 ;（三）免疫标记技术 ;常用的标记物 酶、荧光素、放射性核素、化学发光物质及胶体金 优点：极大的提高了反应的灵敏度，可以对微量物质进行定量、定性 或定位检测。 免疫标记技术主要类型： 免疫酶技术 免疫荧光技术 放射免疫测定法 发光免疫分析 免疫胶体金技术;1)免疫酶测定法 （Enzyme Immunoassay, EIA）;常用酶及其底物 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP） ;分类;双抗体夹心法;特点： 非竞争结合反应 常用于抗原的检测 适用于分子中具有至少两个抗原决定簇的多价抗原，而不能用于小分子半抗原的检测 所用两种抗体分别针对同一个抗原分子的不同抗原决定簇 ;间接法ELISA;2 )免疫荧光技术 (Immunofluorescence Technique) 用荧光素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法 ;常用荧光素 异硫氰酸荧光素（FITC）， 显黄绿色。 藻红蛋白（PE），显红色。 用途：细胞表面CD分子 抗核抗体 ;3 )放射免疫测定法（RIA） 用放射性核素标记一抗或二抗，检测特异性抗原或抗体的方法 敏感度可达pg水平， 其标记物为125I、131I等。 常用于微量物质的检测，如激素、IgE等。 ;4 )发光免疫分析 (luminescence immunoassay LIA) 将发光分析系统和免疫测定相结合而建立的一种新的超微量免疫分析技术。 优点：该方法既具有免疫反应的高度特异性又有发光分析的高灵敏度。 ;化学发光免疫测定 吖啶酯、鲁米诺 生物发光免疫测定 萤火虫、发光水母 化学发光酶免疫测定 辣根过氧化物酶（HRP） 碱性磷酸酶（AP） 电化学发光免疫测定;5 )免疫胶体金技术;6 )免疫印迹法（Western blotting） 该法是将凝胶电泳与固相免疫相接合的检测技术，即将电泳分区的蛋白质转移到固相载体，再用酶免疫、放射免疫技术测定。 常用于检测多种蛋白质;免 疫 印 迹 法 示 意 图;4.蛋白质芯片技术：又称蛋白质微阵列 是一种高通量的蛋白功能分析技术，可用于蛋白质表达谱分析，研究蛋白质与蛋白质的相互作用，甚至DNA－蛋白质、RNA－蛋白质的相互作用，筛选药物作用的蛋白靶点等。;原理：是将各种蛋白质有序地固定于载玻片等各种介质载体上成为检测的芯片，然后，用标记了有特定荧光物质的抗体与芯片作用，与芯片上的蛋白质相匹配的抗体将与其对应的蛋白质结合，抗体上的荧光将指示对应的蛋白质及其表达数量。;第三节 免疫细胞功能的检测 ;;;;细胞分离基本原理;不同细胞密度不同;;密度梯度离心(Ficoll)离心　;（二）淋巴细胞及其亚群的分离和分析;;;;;;流式细胞仪的工作原理和基本结构;4.抗原肽-MHC分子四聚体 是一种药品的名字，可应用于免疫学研究和检测、特异性免疫治疗以及疫苗疗效监测等多个方面;抗原肽-MHC分子四聚体技术分析CTL;二 细胞免疫功能检测;（1）T淋巴