实验五肠道杆菌.ppt

实验五肠道杆菌 实验内容 操作 肥达试验 示教 粪便肠道致病菌的分离和鉴定 实验目的 熟悉肥达试验的操作方法、结果观察及分析 熟悉肠道杆菌在选择鉴别培养基上的生长特点 了解粪便标本肠道杆菌的分离鉴定 肥达试验(Widal Test) 原理：用已知伤寒沙门菌O、H抗原，以及甲型副伤寒、肖氏沙门菌、希氏沙门菌H抗原的诊断菌液与受检血清作定量凝集试验，测定受检血清中有无相应抗体及其效价的试验。 用途：辅助诊断伤寒，副伤寒 方法： 取小试管32支，分成4排，每排8支，依次标号。 于小试管内各加入0.5ml生理盐水。 在每一排第1管中各加患者血清0.5ml，吸打混匀，吸取0.5ml 加入第2管作对倍稀释……依次稀释至第7管弃去0.5ml ，第8管为对照。2~3排按同法稀释。 按8.7.…1列的顺序，分别对第1排各管加入伤寒H抗原0.5ml ；第2排各管加入O抗原0.5ml ；同样对第3排各管加甲型副伤寒（PA）H抗原0.5ml ；第4排各管加乙型副伤寒（PB）H抗原0.5ml 。 将各管混匀，置37℃水浴箱中16~18小时后观察结果。 肥达试验结果观察 根据凝集反应的强弱，分别以“++++、+++、++、+”记录： ++++：液体清澈透明，菌体全部被凝成块，沉于管底。 +++：液体较透明，大部分菌体被凝集而沉于管底。 ++：液体稍透明，管底有少量凝集沉淀物。 +：液体较混浊，可见极少量凝集物。 -：液体混浊，细菌因重力下降于管底呈边缘光滑圆点（与对照管相似）。 血清效价（或滴度）：能与一定量的抗原发生肉眼可见的明显凝集（即“++”凝集）的血清最高稀释倍数，称为血清的效价。血清的效价代表着血清中抗体的含量，其效价愈高，所含抗体的量愈多。如血清最低稀释倍数（1∶40）仍无凝集，则视为阴性或效价低于1∶40；如血清的最高稀释倍数（1∶1280）仍完全凝集，则示血清效价高于1∶1280。 粪便标本肠道杆菌的分离鉴定 SS平板－分离肠道病原菌的强选择培养基 成分和作用： 基础培养基：提供氮源和碳源 胆盐、枸橼酸钠、煌绿：可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。 乳糖，中性红（pH6.8-8.0，红→橙黄） ：致病菌不分解乳糖，但分解蛋白胨产生碱性物质→菌落淡黄色；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈红色 病原菌:小,无色,半透明 非致病菌:大,红色 EMB（Eosin Methyl Blue)平板－分离肠道病原菌的弱选择培养基 成分和作用： 基础培养基：提供氮源和碳源 伊红、美蓝：可抑制肠道非致病菌的生长，而对肠道致病菌抑制作用弱。 乳糖，伊红、美蓝：致病菌不分解乳糖→菌落无色半透明；大肠杆菌分解乳糖产酸，菌落呈紫黑色 病原菌:半透明,无色 非致病菌:紫黑色 克氏双糖铁培养基 接种方法 如何观察 上层含乳糖部分 乳糖发酵：致病菌红色，非致病菌黄色 H2S 然后观察下层 发酵葡萄糖（产酸产气） 动力 * 克氏双糖铁 培养基 尿、靛、动 培养基 分析结果 SS 平板 EMB平板 挑取可疑菌落 玻片凝集试验 粪便 乳糖 硫酸亚铁 固体 葡萄糖 半固体 指示剂:酚红 *