实验六植物种子生命力快速测定.ppt

实验六 植物种子生命力的快速测定 （6）浸种催芽法 先将100粒种子用水浸约两小时吸胀，放于湿润草纸上，盖以湿润草纸，置于氧气充足，室温10-20℃环境中，让种子充分发芽；再以发芽的种子粒数除以100，乘以100%，求得发芽率。 这种测定方法虽然准确，但需要8天时间。 掌握快速测定植物种子生命力的方法 理解TTC/BTB/染料法测定种子活力的原理 TTC法 红墨水法 BTB法 2.1 TTC法 TTC法测定主要作物种子生活力要点 2.2 染料（红墨水）染色法 有生命力种子胚细胞的原生质膜具有半透性，有选择吸收外界物质的能力，一般染料不能进入细胞内，胚部不染色。 而丧失生命力的种子，其胚部细胞原生质膜丧失了选择吸收能力，染料可以自由进入细胞内，使胚部染色。 因此，可以根据种子胚部是否被染色来判断种子的生命力 。 2.3 BTB（溴麝香草酚蓝）法 活细胞呼吸释放CO2，CO2溶于水成H2CO3解离，使种胚周围环境酸度增加，用BTB来反映酸度的改变。 BTB变色范围为pH6.0~7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为pH7.1）。 本实验观察种胚周围的黄色晕圈。 材料：小麦种子 仪器设备：小烧杯；刀片；镊子；温箱 试剂： 0.12％～0.5％TTC溶液（TTC可直接溶于水，溶于水后，呈中性，pH7±0.5，不宜久藏，应随用随配）。 0.02％～0.2％靛红溶液或5％红墨水（酸性大红G）。 BTB法 1）煮沸的1％BTB琼脂胶约20 ml，倒胶至培养皿（1/3皿），冷却。 2）取30粒完好的小麦种子，种胚向下略斜插入胶（不软不硬）。 3）将培养皿置于35 ℃下培养 1 h，对光观察，如果种胚附近呈现较深黄色晕圈是活种子，否则是死种子。 不同方法测定种子生活力记录表 * * TTC法 红墨水法 BTB法 种子生活力：是指种子能够萌发的潜在能力或种胚具有的生命力。没有生活力的种子是死亡的种子，不能萌发。 种子寿命：种子从发育成熟到丧失生活力所经历的时间。 种子寿命既与植物种类有关，也与贮藏条件（种子含水量、贮藏温度）有关。 正常性种子：水稻、玉米、小麦等种子（1-3年） 短寿命： 柳树种子（12h） 长寿命： 莲子（400年） 贮存条件：低温、低湿，保存时间长 种子活力检测评估方法： (1) 还原力：呼吸→NADH → 还原TTC，胚呈红色。 (2) 原生质着色：活种子不易着色，原生质膜具有选择透性。 (3) 呼吸释放CO2，pH下降，酸碱指示剂显色。 (4) 细胞中的荧光物质：紫外照射发蓝、蓝紫色荧光。 (5) 外观目测法：用肉眼观察玉米种胚形状和色泽。凡种胚凸出或皱缩、显黑暗无光泽的，则种子新鲜，生活力强，可作生产用种。 1. 实验目的 2. 实验原理 TTC（2,3,5 - 三苯基氯化四氮唑）的氧化态是无色的，可被氢还原成不溶性的红色三苯甲腙（TTF）。 当TTC溶液渗入种胚的活细胞内，并作为氢受体被脱氢辅酶（NADH或NADPH）还原时，可产生红色的三苯甲腙（TTF），胚染成红色。 如果种胚死亡则不能染色，种胚生命力衰退或部分丧失生活力则染色较浅或局部被染色。 因此，可以根据种胚染色的部位或染色的深浅程度来鉴定种子的生命力。 TTC还原反应： 2,3,5 - 三苯基氯化四氮唑 三苯甲腙 3～4 1.0 无须准备 大豆、 菜豆、亚麻、 二叶草 3～4 0.1 剥去种皮 花生、甜菜、大麻、 向日葵 2～3 1.0 剥去种皮 棉花、荞麦、蓖麻 0.5～1 0.1 纵切 高粱、玉米及麦类作物 2～3 0.1 去壳纵切 水 稻 在35℃下 染色时间(h) TTC浓度(%) 种子准备 作 物 3. 材料、仪器设备与试剂 4. 实验步骤 1）将种子用温水（约30℃）浸泡2~6h，使种子充分吸胀。 2）随机取小麦种子30粒，沿种胚中央准确切开，每切1粒确认各半种子皆含胚后，分别放置两只培养皿中。 3）在上述一只培养皿中加入TTC溶液（至其中种子全部浸入为止），恒温箱（30~35℃）中保温至少30 min。从TTC溶液中取出种子，直接观察种胚颜色变化。 4）在上述另一培养皿中加入约5 ml红墨水，室温下浸5 min；倒出红墨水后，用清水冲洗种子1~2次（注意要缓慢冲洗，不要让水流直接冲到种子上），观察种胚被染色的情况。 TTC/红墨水法 TTC法： 凡种胚全部或大部分被染成红色的即为具有生命力的种子； 种胚不被染色的为死种子。 红墨水法： 凡胚部不着色或表面略带浅红色者，即具有生活力的种子； 若胚部染成与胚乳相同的红色，则为死种子。 鉴定标准 TTC/红墨水法： 1）将种子用温水（约30℃）浸泡2~6h，使种子