尹昌林SHH 信号通路对脑胶质瘤干细胞增 殖与分化调控作用的实验研究ppt课件.ppt

SHH 信号通路对脑胶质瘤干细胞增  殖与分化调控作用的实验研究 ;Fig 1 HH 信号通路的组成和信号传递过程 A、HH 信号通路的组成和信号传递过程，B、HH 信号对GLI 的调控;一、材料和方法; 1、 人脑胶质瘤组织和细胞株中脑胶质瘤干细胞 的分离和体外培养，参照Singh等的方法，采用人CD133细胞分选试剂盒，以免疫磁珠法进行。 2、体外培养活细胞数测定， 采用CCK-8试剂盒，以WST-8法进行。 3、 BGSCs增殖与分化过程中 SHH 信号通路基因表达的检测 ：采用RT-PCR法检测； ; 4、BGSCs增殖与分化过程中 SHH 信号通路蛋白表达的检测 ：采用 Western Blotting和免疫荧光技术检测； 5、细胞周期测定：细胞收集、固定后以PI染色，流式细胞术检测分析； 6、细胞比例测定：细胞收集、固定后行免疫荧光单标染色，流式细胞术检测分析。; CD133+细胞从原标本中的1.8%～29.7%提高到46.8%～88.7%，而相应的CD133-细胞群标本中CD133+细胞比例降至1%以下。 ;人脑胶质瘤干细胞生长情况; ; ; ; ; ;250bp; ; ; 脑胶质瘤干细胞分化过程中 SHH 信号通路蛋白表达情况 ;1; ; ;27kD; ; SHH 信号通路对中枢神经系统的发育是必需的。 在体实验：虽然GLI-1基因敲除的小鼠能正常发育，但SHH、Ptch、GLI-2或GLI-3基因敲除的小鼠均在出生前即死亡，并伴有脑部的严重缺陷。 ; 在本课题研究中我们发现：在脑胶质瘤组织和细胞株中均检测到SHH 信号通路关键分子Shh、Gli-1和Bmi-1表达，而正常成人脑组织中则未检测到；对其表达情况进行分析表明，Shh和Gli-1表达与胶质瘤病理分级有关，高级别胶质瘤组织中表达强于低级别胶质瘤组织中表达。 ; 胶质瘤干细胞分化时，Gli-1表达呈逐渐增强，然后逐渐减弱至消失的过程，CD133表达逐渐减弱，MAP2、GFAP和MBP出现表达并逐渐增强，因此，我们推测SHH信号通路蛋白表达可能参与了胶质瘤干细胞分化启动和阶段性调控作用。 ;总 结 ;Thank U！