胃癌中hhip patched基因的表达及甲基化水平与临床特征的关系-expression of hhip patched gene in gastric cancer and the relationship between methylation level and clinical features.docx

胃癌中 H 胃癌中 HHIP、Patched 基因的表达及甲基化水平与临床特征的关系 中文摘要 中文摘要 中文摘要 胃癌中 HHIP、Patched 基因的表达及甲基化水平与临床特征的关系 I I PAGE PAGE IV 胃癌中 HHIP、Patched 基因的表达及 甲基化水平与临床特征的关系 中文摘要 研究背景和目的： 胃癌是严重危害人类健康的最常见的恶性肿瘤之一，发病率位居所有恶性肿瘤的 第二位，死亡率列所有恶性肿瘤的第三位。目前根治性手术仍然是胃癌的主要治疗方 式，也是唯一有希望治愈胃癌的手段。但临床上仍有大多数患者确诊时已是中晚期， 手术效果不佳，直接影响预后。因此深入研究胃癌发生、发展的分子机制，可为胃癌 早期诊断提供依据，同时也为临床治疗提供有效的靶点治疗，具有重要的临床意义。 近年来有研究证明 Hedgehog(HH)信号传导通路在胃的胚胎发育过程中起非常重 要的调控作用，该通路的过度激活可导致胃癌的发生，因此 HH 通路与胃癌的发生、 发展密切相关，针对该通路的特异性靶向治疗有可能成为临床上治疗胃癌的有效的新 措施。HH 通路主要由 HH 配体，膜受体 Patched (Ptch)、Smoothened (Smo)及下游的 转录因子 Gli 组成。近年来有研究发现 Hedgehog 通路中还包括 Hedgehog-interacting protein (HHIP) 基因，HHIP 能和 Patched 竞争性结合 Hh 蛋白，从而阻断 HH 信号转 导。对 HH 通路来说，HHIP 基因与 Patched 基因是该通路的两个负反馈因子，可直 接抑制 Hedgehog 通路，具有极其重要的意义。因此本课题选用 HHIP 和 Patched 为目 的基因，进行深入研究。 表观遗传学是指 DNA 序列不发生变化，但基因表达却发生了可遗传的改变，这 种改变是细胞内除了遗传信息以外的其他可遗传物质发生的改变，即基因型未发生变 化而表型却发生了改变，且这种改变在发育和细胞增殖构成中能稳定传播。其中 DNA 甲基化，组蛋白修饰改变，非编码 RNA 等是表观遗传修饰的主要方式，也是研究的 热点。目前研究发现：基因组的广泛低甲基化是肿瘤细胞的一个普遍特征；肿瘤抑制 基因启动子区的高甲基化可导致抑癌基因沉默、失活致表达产物减少或丧失。DNA 甲基化与胃癌之间关系密切，研究发现在胃癌的各个阶段都能检测有基因甲基化的存 在，甚至癌前病变阶段也能发现。本文对胃癌中 HHIP、Patched 基因的表达及甲基 化水平进行检测和分析，并通过随访，观察 HHIP、Patched 基因的表达与三年总生 存率的相关性，试图发现 HHIP、Patched 基因在胃癌发生、发展的作用机制及与胃 癌预后的相关性。 目前有报道 Patched 基因在胃癌中启动子区呈高甲基化，而研究主要集中在胃癌 细胞株，对 HHIP 和 Patched 基因在胃癌组织中的甲基化状态分析未见相关报道，因 此本文以 HHIP 和 Patched 为研究基因，分别检测两个基因在胃癌组织、癌旁组织中 的表达和启动子区 CpG 岛甲基化状态，分析其与临床病理特征的关系。并通过随访， 观察 HHIP、Patched 基因的表达与三年总生存率的相关性。对人胃癌细胞株 AGS 在 体外予去甲基化药物 5-aza-dc 干预，观察干预前后 HHIP mRNA 表达差异，启动子区 CpG 岛甲基化状态的影响。构建稳定的 HHIP 过表达慢病毒载体，转染胃癌细胞株 AGS，观察转染前后 HHIP mRNA 表达和启动子区 CpG 岛甲基化状态的差异。从而 揭示 HHIP、Patched 基因在胃癌发生、发展的作用机制及与胃癌预后的相关性，为 胃癌的早期诊断、判断预后和靶向治疗提供新的思路。 研究方法和材料： 1.研究材料 胃癌标本取自 2009 年 6 月-2013 年 12 月在张家港市第一人民医院 接受手术治疗的病人，术前均未经化疗和放疗，术后病理检查确定组织类型均为胃腺 癌，无其他部位原发肿瘤。共选取 60 例胃癌组织和 60 例癌旁正常组织，每例标本的 癌组织和癌旁正常组织均常规病理切片证实，并液氮保存。其中男性患者 34 例，女 性患者 26 例，年龄 36-72 岁之间，平均年龄 60.82 岁，Ⅱ期胃癌患者 40 例，Ⅲ期患 者 20 例，高中分化 32 例，低分化患者 28 例，有淋巴结转移 24 例，无淋巴结转移 36 例。胃癌细胞株 AGS 购自中国科学院上海细胞库，来源于一个未经治疗的切除的 胃肿瘤碎块，为腺癌细胞，具有局部浸袭转移能力。 2.研究方法 主要分为对胃癌组织及癌旁组织研究；对胃癌细胞株 AGS 研