微小rna-126对胃癌血管新生的调控研究-study on the regulation of small rna - 126 on angiogenesis in gastric cancer.docx

摘要 摘要 万方数据 万方数据 摘 要 背景与目的： 胃癌是中国乃至亚洲的主要癌症致死原因之一。血管新生是肿瘤侵袭、转 移的重要过程，因此阻断肿瘤血供、抑制肿瘤血管新生是控制肿瘤生长和转移 的重要途径之一。近年，人们发现microRNA在肿瘤的发生、发展及预后中起着 重要的作用，同时发现其与肿瘤血管新生、远处转移及肿瘤分期有着密切的联 系。有研究表明，miR-126在胃癌组织中低表达，且与患者的预后相关。我们通 过生物学软件预测，miR-126与血管内皮生长因子A（Vascular endothelial growth factor A, VEGFA）存在互补结合序列，双荧光素酶实验证实miR-126可靶向结合 VEGFA。众所周知，VEGF家族通过调控肿瘤的脉管新生在肿瘤的生长和转移中 扮演着重要的角色，尤其是VEGFA在肿瘤血管新生中发挥重要作用。我们研究 拟通过建立稳定的miR-126过表达和抑制表达的SGC-7901细胞系，并通过荷瘤鼠 动物实验，分析miR-126与VEGFA之间的关系，进一步明确miR-126的表达与胃 癌血管新生的关系。 方法： 1、根据miR-126的基因序列，设计过表达及抑制表达miR-126慢病毒载体， 由上海吉凯基因（GENECHEM）构建完成。将SGC-7901细胞分为5个实验组： miR-126组（过表达miR-126），Control-1组（过表达miR-126对照组），Inhibit组 （抑制表达miR-126），Control-2组（抑制表达miR-126对照组），SGC-7901组（空 白对照组）。通过慢病毒转染SGC-7901，经过嘌呤霉素筛选之后，获得转染细胞， 并通过实时荧光定量PCR检测miR-126的含量，Western Blot检测相关蛋白VEGFA 表达，建立稳定的细胞系，MTT检测细胞增殖活性。 2、将稳定表达miR-126的SGC-7901接种到裸鼠皮下，观察成瘤情况并测瘤 重，计算抑瘤率；免疫组化检测VEGFA及CD34的表达。 结果： 1、miR-126 慢病毒载体转染 GC 细胞，经嘌呤霉素筛选之后，荧光定量 PCR 检 测 显 示 miR-126 组 的 miR-126 表 达 量 明 显 高 于 SGC-7901 组 及 Inhibit 组 II （P0.01），另外，Inhibit 组的表达量明显低于 SGC-7901 组（p0.05）。 2、miR-126 对 VEGFA 表 达 的 影 响 ： 根 据 Western Blot 蛋 白 灰 度 比 较 ， miR-126 抑制表达组 VEGFA 的表达量较过表达组和空白组高，且是过表达组的 2.9 倍（P 0.01）。 3、MTT 检测细胞增殖：过表达 miR-126GC 细胞增殖受到抑制，24 小时抑 制明显，抑制 miR-126 表达，细胞增殖较过表达及空白组升高（p0.05）。 4、miR-126 对裸鼠成瘤的影响：miR-126 过表达组、miR-126 抑制表达组、 SGC-7901 对照组的平均瘤重分别为：0.57±0.21g，2.79±0.31g，2.01±0.34g，抑 制表达组瘤重明显高于过表达组和正常对照组（p0.01 或0.05）。 5、免疫组化检测各实验组中 VEGFA 及 CD34 表达：VEGFA 在细胞质中表 达，呈染色呈淡黄色至棕褐色。抑制表达组 VEGFA 呈高表达，过表达组及空白 对照组表达较抑制表达组低，有统计学差异（P 0.05）。miR-126 过表达组、 miR-126 抑制表达组、SGC-7901 对照组的微血管密度（MVD）分别为：20.25±3.39， 52.00±4.47，30.35±3.34。抑制 miR-126 表达的 MVD 较过表达组及空白对照组高， 且明显高于过表达组（P0.01）。 结论： 在胃癌中，miR-126 可负向调控 VEGFA 的表达，从而进一步调控胃癌的血管 新生。 关键词：miR-126；血管内皮生长因子 A；胃癌；血管新生；慢病毒 III Abstract ABSTRACT Background and objective: Gastric cancer is one of the most common leading cause of cancer mortality in China and even in Asia.Tumor malignancy is characterized by local invasion and metastases,which are the main factors leafter radical surgery.ading to treatment failu