调节性和效应性t细胞在胆道闭锁小鼠免疫炎症发展中作用及影响-the role and influence of regulatory and effector t cells in the development of immune inflammation in mice with biliary atresia.docx

万方数据 万方数据 参考文献 100 全文小结 98 综 述 100 胆道闭锁免疫学研究新进展 101 参考文献 110 致 谢 114 附录 1 在校攻读学位期间发表论文 113 附录 2 英文缩略表 114 华中科技大学博士 学位论 华 中 科 技 大 学 博 士 学 位 论 文 PAGE 10万方数据 PAGE 10 万方数据 前 言 胆道闭锁（Biliary atresia，BA）为引起新生儿梗阻性黄疸并需行手术治疗的最常 见的病因，肝内外胆管的进行性炎症及肝纤维化为其主要的病理特征。研究发现在胆 道闭锁肝脏尤其是汇管区有大量炎性细胞浸润[1]，尽管实施肝门-空肠吻合术( Kasai 术）可以重建肝外胆管通路，但是，肝内胆管的进行性炎症反应仍然继续进行，大约 80％的患儿最终因胆汁性肝硬化需要进行肝移植[2]。胆道闭锁疗效较差，主要原因是 其确切病因及发病机制还不完全清楚，但研究已表明，由病毒感染引起的自身免疫介 导的炎性损伤在胆道闭锁的发病机制中起着至关重要的作用[2,3-5]。 研究者通过恒河猴轮状病毒（Rhesus rotavirus, RRV）建立胆道闭锁动物模型，发 现胆道闭锁是由病毒引起的胆管进行性炎性阻塞，这与人类胆道闭锁表现十分类似 [3,6-8]。在胆道闭锁小鼠中，肝脏汇管区炎性细胞包括 CD4+T 细胞、CD8+T 细胞、 NK 细胞等明显增加，炎性因子如 IL-12、IFN-γ、IL-6、IL-8 等也显著增加[9-11]。然 而，研究人员却发现，即使将 IL-12/IFN-γ 通路阻断后，胆道闭锁的病理进程也很难 得以完全逆转[12,13]，这表明，胆道闭锁的发病除与 Th1 细胞有关以外，还很可能与 其他的 T 细胞功能亚群密切相关。调节性 T 细胞（regulatory T cell，Treg）是一类具 有免疫负调节功能的 CD4+T 细胞亚群，其可通过细胞间直接接触或释放某些细胞因 子（如 IL-10、TGF-β）而抑制效应性 T 细胞（如 CD4+Th1 细胞、CD4+Th17 细胞和 CD8+细胞毒性 T 细胞等）功能[14]。辅助性 T 细胞 17（T help cell 17, Th17）是近年 来发现的另一类 CD4+T 细胞亚群，它主要通过分泌 IL-17 来促进自身免疫炎症的发 生[15]。DC 细胞是体内唯一能启动免疫应答，并能有效刺激再次免疫应答的抗原递 呈细胞(antigen processing cells，APC)，可通过分泌 IL-6 等细胞因子来调节 Treg 细胞 和 Th17 细胞分化[16]。Toll 样受体（Toll-like receptor，TLR）是一类最重要的模式识 别受体，可识别微生物病原 体病原相关分 子模式（pathogen associated molecular pattern，PAMP）。它们可表达于 DC（树突状细胞，功能最强的 APC ）、Treg 和某些 效应性 T 细胞。TLR 识别并结合病原体所携带的相应 PAMP，从而启动激活信号的转 导，在诱导异常免疫应答和炎性反应中发挥关键作用[17]。Treg 细胞可抑制免疫应答， Th17 细胞是参与自身免疫性炎症的主要效应细胞，二者分化和功能异常均可导致自 身免疫病发生。研究人员发现，Treg 细胞和 Th17 细胞失衡在自身免疫性肝病等一些 自身免疫性疾病的发病机制中起重要作用[18-20]，而我们对胆道闭锁患儿的研究也发 现[21,22]，胆道闭锁患儿 Th17 细胞明显高于对照组，并且伴随有 Treg 细胞的降低， 而胆道闭锁患儿 TLRs 升高[23]，虽然胆道闭锁的具体发病机制还未完全清楚，但根 据相关研究以及我们之前的研究结果，我们推测其可能机制为：嗜胆管病毒（如轮状 病毒）感染机体后后导致胆管上皮损伤，随后释放某些 PAMPs，这些 PAMPs 可以和 DC 细胞、Treg 细胞或 Th17 细胞内的 TLRs 结合，从而调控他们的表达或影响微环境 中某些细胞因子的产生，进而调控 Treg 细胞和效应性 T 细胞的分化以及功能等，导 致异常的自身免疫应答，最终导致胆道闭锁的发生发展。 因此，我们通过建立胆道闭锁小鼠模型，来进一步明确Treg细胞和Th17细胞以及 肝脏微环境变化在胆道闭锁免疫炎性发病机制中的作用。本研究借助免疫组织化学技 术、RT-qPCR、Western blot、ELISA和流式细胞术等分析胆道闭锁小鼠肝脏组织中Treg 和Th17细胞表达变化及肝脏细胞因子微环境变化，以及体外细胞共培养实验检测Treg 细胞和Th17细胞之间的相互作用，并