小肠粘膜下层材料的制备及相关实验分析-preparation and experimental analysis of intestinal submucosa materials.docx

中国辐射防护研究院硕士学位论文 I 中 文 摘 要 研究目的 探索建立前置处理-超声结合化学处理的方法制备小肠粘膜下层，并依次 从组织学、化学试剂残留量测定、细胞毒性、组织相容性、组织修复功能验证等方 面评价制备的小肠粘膜下层生物学性能。 研究方法 采用超声生物技术，结合胰酶、SDS 试剂，处理经过机械刮除小肠浆膜、 肌层、粘膜层等前置处理的小肠粘膜下层；将样品用固定剂固定后，在光学显微镜 和真空扫描电子显微镜下观察并比较脱细胞处理前后小肠粘膜下层胶原结构；采用 亚甲基蓝-分光光度法检测小肠粘膜下层材料残留的 SDS 含量；体外培养 L929 细胞， 制备材料浸提液，采用 MTT 法计算细胞相对增殖率，判定材料的细胞毒性；大鼠皮 下埋入材料，通过观察局部反应评价制备的 SIS 材料的组织相容性；建立大鼠腹壁 缺损模型，以脱细胞真皮基质为对照，比较两组材料在大体观察、粘连评分、组织 学观察方面差异，评价小肠粘膜下层对腹壁缺损的修复能力。 研究结果 光学显微镜和真空扫描电子显微镜下观察，制备的 SIS 材料无细胞残留 成分，基质成分未发生明显变化；采用亚甲基蓝-分光光度法检测材料清洗液中 SDS 含量轻微，对人体无副作用；细胞毒性实验显示，制备的 SIS 材料细胞毒性评价为 1 级，符合体内植入性医用材料要求；皮下埋入实验显示，术后 8 周制备的 SIS 材 料基本上降解完毕，胶原纤维结构不可见，几乎全部被机体组织包裹、吸收，新生 成的纤维结构纤细、松散、平型排列。小肠粘膜下层修复组织缺损术后 24 周观察， 材料胶原纤维全都被机体组织包裹、吸收，被平行或交错分布的纤维结缔组织替代， 形成了成熟的肉芽组织，粘连反应轻微，无感染、疝的发生。 研究结论 采用前置处理-超声联合化学处理的方法可有效去除残留细胞成分，并保 留其完整的三维结构；制备的材料 SDS 残留量轻微，细胞毒性低，具有良好的组织 相容性和生物可降解性；可有效修复腹壁缺损，是用于组织修复重建的良好基质。 关键词：小肠粘膜下层；细胞毒性；组织相容性；腹壁缺损修复  ABSTRACT Objective ： To explore the establishment of pre-processing-ultrasound combined with chemical treatment method for the preparation of small intestinal submucosa, and evaluate the biological properties of small intestinal submucosa by histological observation, measuring the amount of tissue residues of chemicals, cytotoxicity, biocompatibility as well as the functional verification of tissue repair. Method ： Using ultrasonic biotechnology, combined with trypsin, SDS reagent handle the small intestinal submucosa after the pre-treatment process, which points mechanically scraping intestinal serosa, muscularis and mucosa ; The sample is fixed by a fixative, and then observed under the optical microscope and vacuum scanning electron microscope to compare the small intestinal submucosa collagen structure before and after acellular treatment; Using methylene blue-spectrophotometric method to detect residual SDS content of small intestinal submucosa material; Culturing L929 cells in vitro and preparing material extracts , MTT assay is used to calculate relative cell proli