微小rna-148a对胃癌细胞mkn-45增殖能力的影响及机制-effect and mechanism of micro rna - 148a on proliferation ability of gastric cancer cell line mkn - 45.docx
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微小rna-148a对胃癌细胞mkn-45增殖能力的影响及机制-effect and mechanism of micro rna - 148a on proliferation ability of gastric cancer cell line mkn - 45
上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。必威体育官网网址□,在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不必威体育官网网址□。(请在以上方框内打“√”)学位论文作者签名:指导教师签名:日期:年月日日期:年月日微小RNA-148a对胃癌细胞MKN-45增殖能力的影响及机制摘要目的:通过检测比较患者癌组织及癌旁组织中微小RNA(miR)-148a的表达情况,进而分析探讨微小RNA-148a对人胃癌细胞株MKN-45细胞增殖的影响。方法:采用实时定量PCR技术检测60例胃癌患者癌组织及癌旁组织中miR-148a的表达水平。利用慢病毒包装建立稳定表达miR-148a的MKN-45细胞系为转染组,未转染的MKN-45细胞系为对照组。CCK8法检测胃癌细胞MKN-45的增殖情况,通过targetscan预测miR-148a的靶基因,蛋白印迹法检测靶基因的表达水平。结果:54例(90.0%,54/60)胃癌组织中miR-148a的表达量下调,其中37例(61.7%,37/60)下降2倍以上;胃癌组织miR-148a的表达量较癌旁正常组织显著降低(P0.05);淋巴结转移、癌旁血管浸润及TNM分期III~IV者其表达量明显降低(P0.05)。转染组miR-148a的表达量明显高于对照组(8.00±1.02比1.00±0.15,P0.01)。从第3天开始,转染组吸光度值明显低于对照组[(0.978±0.091)比(1.182±0.074),P=0.000]。通过targetscan发现,CDC25可能是miRNA-148a的靶基因;蛋白印迹法显示,转染组的CDC25B蛋白表达较未转染组明显降低。结论:miR-148a在胃癌中表达明显低于癌旁组织,其并具有抑制胃癌细胞增殖的作用,CDC25B可能是miR-148a发挥抑癌作用的靶基因。关键词:胃肿瘤,微小RNA,细胞增殖,CDC25B基因THEREGULATORYMECHANISMOFMIR-148AONCELLPROLIFERATIONINGASTRICCANCERCELLLINESMKN-45ABSTRACTObjective:Thestudywasdesignedtoinvestigatetheregulatorymechanismofmir-148aoncellproliferationingastriccancercelllinesMKN-45.Methods:TheexpressionofmiR-148ain60casesofgastriccancerandthetissuesadjacenttothemwasdetectedbyqRT-PCRtechnique.LentiviralvectorofmiR-148awasconstructedandtransfectedintocelllineMKN-45,ThetransfectedgroupwasthegastriccancercelllineMKN-45thattransfectedmiR-148aandexpressitstably,andthethecontrolgroupwastheemptytransfectedgroup.TheproliferationingastriccancercelllinesMKN-45wasdetectbyCCK8.ThetargetgeneofmiR-148awaspredictedbyTargetScan.TheexpressionoftargetgenewasdetectbyWesternBlottingandqRT-PCRtechnique.Results:TheexpressionofmiR-148ain54casesofgastriccancertissue(90.0%,45/60)werereduced,and37cases(61.7%,37/60)reduced2times;MiR-148aissignificantlydownregulatedingastriccancertissuethaninnormaltissueadjacenttogastriccancer(P0.05),theexpressioninlymphnodemetastasis,vascularinvasionbycancerandTNMstageIII~IVisalsosignificantlydownregulated(P0.05);TheexpressionofmiR-
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