食管鳞癌mtdna编码区nd5 f340y突 变的检测与分析-detection and analysis of sudden changes in mtdna coding region nd5f34y of esophageal squamous cell carcinoma.docx

万方数据 万方数据 本课题受到如下项目基金资助： ★ 郑州市 2013 年第一批科技计划项目(科技创新团队) [项目编号：131PCXTD628] ★ 2014 年度河南省医学科技攻关计划项目(省部共建项目) [项目编号：201401009] ★ 河南省基础与前沿技术研究计划项目 [项目编号：132300410409] ★ 河南省科技厅基础与前沿项目 [项目编号：102300410082] A thesis submitted to Zhengzhou University for the degree of Master The detection and analysis on the ND5 F340Y mutation of encoding gene of mitochondrial DNA in esophageal squamous carcinoma By: Alan Chu Supervisor: Zongwen Liu Internal medicine The Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University May, 2016 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研 究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人 或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。 学位论文作者：  日期： 年 月 日 学位论文使用授权声明 本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。 根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部 门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州 大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学 位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑 州大学。必威体育官网网址论文在解密后应遵守此规定。 学位论文作者： 日期： 年 月 日 摘 摘 要 万方数据 万方数据 食管鳞癌 mtDNA 编码区 ND5 F340Y 突变的检测与分析 研 究 生：楚 阿 兰 导 师：刘 宗 文 教 授 郑州大学第二附属医院 内科学 郑州 450014 摘 要 目的：在对线粒体逐渐深入的研究中，人们发现了线粒体 DNA(mitochondrial DNA, mtDNA)，它存在于线粒体内基底膜上，是一种唯一存在于核外、具有半 自主性的遗传物质，以往的研究显示，mtDNA 的 ND1 基因可能影响食管鳞癌 的发生、发展。但是 mtDNA 的全编码区基因的突变及其突变基因在功能、能量 代谢方面与食管鳞癌的关系如何，国内外以往的报道较少。本研究中我们对食 管鳞癌组织、正常食管粘膜组织的 mtDNA 进行了全编码区基因的检测，找出高 发突变基因及高发突变位点，并分析其对食管鳞癌能量代谢的影响。 方法：以郑州大学第二附属医院胸外科和郑州大学第一附属医院胸外科， 手术治疗的 30 名食管鳞癌患者为研究对象，术中切取病人的癌组织共 30 例， 及其相对应的正常食管粘膜组织 2 例，置于负 80 度冰箱冻存备用，通过提取组 织标本的 mtDNA，利用 PCR 扩增、扩增产物纯化和直接测序等技术，运用美 国 NCBI 数据库的基因序列分析软件，将组织 mtDNA 全编码区序列与目前公 认的修正剑桥标准序列(revised Cambridge Reference Sequence, rCRS) 进行比对 (BLAST)，找出 mtDNA 全部编码区的高发突变位点及高发突变基因，利用进化 保守性预测软件(MutationAssessor)对其功能性影响进行分析，并利用免疫组化 技术分析高频突变对食管鳞癌能量代谢的影响。 结果：1.在 30 例食管鳞癌组织中共检测到 216 个 mtDNA 突变，包括 175 个种系性突变，41 个体细胞性突变。在这 216 个 mtDNA 突变中共检测到 182 个蛋白编码突变(包括 63 个错义突变)。 2.在检测到的 216 个 mtDNA 突变中，有 10 个异质性突变，剩余全部为同 I 质性突变。 3.利用 MutationAssessor 软件，通过对体细胞性和种系性错义突变的功能性 影响分析，我们发现体细胞性突变(3/12)比种系性突变(2/46)有更高的功能性影 响。 4.在这 5 种高功能性错义突变中，位于 ND5 基因的异质性 F340Y 突变发生 率 最 高 ， 达 26.7%(8/30) ， 影 响 指 数 (FI