桃prunus persica两种mads box基因的克隆及其功能分析-桃桃两种麦斯盒子基因的克隆及其功能分析.docx

缩写CfABCetylTriethyLAmmoniumBromide十六炕基三己基澳化镀EDTAEthyleneDiamineTetra∞licAcid乙二眩囚乙酸bpbasep副m碱基对BSABovineSerumAlbumen牛血清白蛋白DNADeoxyriboNucleicAcid脱氧核糖核酸DnaseDeoxyriboNuclease脱氧核糖核酸酶dNTPd∞xyNucleotideTriphosphates(usuallyamixofd皿P/dTτP/dCfP/dGτP)脱氧核营三磷酸(通常为d且P/dTIP/dCfP/dGTP的混合物)LBLuria-Bertanimedialuria-Bertani培养基础SC6H130N4S2-(N-吗啡琳)乙磺酸pαPolymeraseChainReaction聚合酶链式反应-RNARiboNucleicAcid核糖核酸RnaseARiboNucIeaseA核糖核酸酶AdHzOdistilledwa阳蒸饱水ddHzO双蒸水KanKanamycin卡那霉素Y四YeastExtract-PhosphatemediaYeastExtract-Phosphate培养基∞fCefotaximeSodium头抱霉素rifRifampicin利福平MSMurashigeandSkoogmedìaMurashìgeandSkoog培养基NAAQ-NaphthaleneaceticacidQ-茶乙酸6-BA6-BenzylAm函。purine6-韦氨基嘿岭ODoptica1density光密度TETrisEDTAEBethidiumbromide漠化乙绽7VBsB5维生素Tris(2，3-dibromopropyl)phosphate三起甲基氨基甲炕PVP聚乙烯毗咯炕酣SDSSodiumdodecylsulfate十二炕基磺酸纳8首都师范大学硕士学位论文摘要了解植物由营养生长向生殖生长的转变的调节过程，对于控制有花植物的生妖发育是很有意义的回至今已经鉴定了许多参与控制果实和花发育的必4DSbox基因。MADSbox基因多数是由M、I，K和C四个区域构成的，很少一些必4DSbox基因在M区上游还具有一段富含碱性氨基酸的N末端区域.其中M区高度保守，古编码真核生物转录因子的ONA结合域，具有ONA结合和二聚体形成的作用。经典的ABC模型中所涉及的MADSbox基因有A、B、C三类功能，随后ABC莫型不断得到充实和完善，0类和E类功能基因的出现壮大了MADSbox基因家荣，IABω模型、ABCOE模型和四聚体模型招继涌现，使人们对花吏育的机理有了更深入的了解.近来的研究表明必似5box基因家族并不只在花器官的发育中起调控作用，WJSbox基因在控制开花时间、决定分裂组织的分化、控制胚胎发育、根的形克以及种子和果实的发育等方面都起着重要的作用.此外研究发现，同一剧lJSDX基因在发育的不同时期可以起不同的功能.MADSbox基因对生殖生长的调控是近年来撼。Sbox基因作用研究的重.为了研究李属(Prunussp.)果树生殖调控的相关基因，对国际公共数据库3的李属植物的EST但xprω，seds吨uen臼tags)序列进行了电子拼接，获得了8个。t5box基因的cDNA序列，并利用陀R技术从桃的果实中克隆出其中的4个}阳，分别命名为PPMAfJS2、F尹脱lJS4、PpJfAlJS6和PPMAfJS几其中助剧lJS4和观4056在GenBank中的登陆号分别为AY705972和AY705973.ppMADS4基因长iObp，包含一个732bp的开放阅读框，编码243个氨基酸?ppMADS6基因长90峙，包含1个768bp的开放阅读框，编码256个氨基酸.F如剧lJS4和pp剧lJS6在序列上分别与拟南芥中的d臼MOlJS基因和矮牵牛中的U基因高度同源.RT-陀R分析表明，ppJfAlJS4基因在花瓣、心皮、果实及核仁表达，应属于己知的花器发育的调控的C类刷lJSbox基因。F如剧DS6基因在片、花瓣、心皮、果实及果仁中表达，应属于调控植物由营养生长向生殖生长首都师范大学硕士学位论文过渡的A类剧DSbox基因，为了进一步确定基因的功能，对巾MADS4基因进行了拟南芥转基因分析.通过限制性内切酶切割和连接反应，构建该基因的正义表达载体，并置于C刷V35S启动子的驱动之下。利用农杆菌介导的浸溃法转化拟南芥。将通过抗生素筛选的阳性植株，使用CTAB法提取成株基因组DNA，进行PCR检测。通过对于转基因拟南芥的表型观察，发现株型与花型均发生了改变，这些特征，与AGAMOlJ:瑾.因在拟南芥中的异位表达结果相似。这些结果表明ppMAf)S基因应与C类基因具有相似的功能.关键词:MADSbox基因，桃，花发育，拟南芥