第9讲生化分离技术及应用.pdf

第九章 生化分离技术及应用 本章重点  主要纯化方法 （分配层析，吸附层析，凝胶过滤层析 离子交换层析，亲和层析，疏水层析，不连续PAGE SDS，等电点聚焦，双向电泳）的原理？ 蛋白质分离基于蛋白质的哪些性质？ 蛋白质分离纯化一般原则  大概能够针对蛋白质的性质的差异设计相应的实验方 案对蛋白质进行分离 一离心机 (分析性超速离 心主要用于检测 ㈠种类 离心机 大分子物质的沉 降特征和结构等) 制备型 分析型 分析性超速离心机 普通离心机 冰冻离心机 台式（或地 台式高、超速 大容量冰 高速冰冻 超速冰冻 面式）普通 离心机 冻离心机 离心机 离心机 离心机 0.6-10万转/分 小于0.6万 0.6-2.5万 2.5-8万或 转/分 更高 ⒈普通制备型离心机 分离、浓缩、提纯样品中，固液分离。 ⑴ 台式或地面式普通离心机 低、中速离心机，转速在3000—6000rpm ，这类离心机可用于 收集易沉降的大颗粒 （如红血球、酵母细胞以及组织块等）。 ⑵ 台式高、超速离心机 转速0.6-10万转/分或更高。 这类离心机可用于收集不易 沉降的细胞器、膜等小颗粒。 ⒉制备型冰冻离心机  因此需要有冷却离心腔的致冷设备，一般温度控制在0—4℃， 速度控制准确；  可用于收集微生物、细胞碎片、大细胞器、免疫沉降物等， 病毒、小细胞器（如核糖体）、蛋白质等大分子。 ⑴ 大容量冰冻离心机，小于0.6万转/分 ⑵ 高速冰冻离心机，0.6-2.5万 ⑶超速冰冻离心机，2.5-8万或更高 ⒊分析型超速离心机 XL-A 分析型超速离心机 主要技术指标： 检测波长范围200nm- 800nm 转子最大转速 40000RPM (二)相关概念 ⑴ 沉降系数 （s）：指单位离心力作用下颗粒沉降的速度。 蛋白质，核酸，核糖体，病毒等的沉降系数介于1- 200 ×10-13 的范围。为方便起见，把10-13秒作为一个单 位，用S表示，1S单位等于1 ×10-13秒。 ⑵ 沉降速度：是指在强大离心力作用下，单位时间内物 质运动的距离。 颗粒沉降的时间和速度取决于：  离心力、 颗粒的大小形状和密度、  沉降介质的密度和黏度。 ㈢离心技术类型