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荧光探针 朱 1 2 内容提要 • 探针的分类 • 探针的应用 • 探针的选择 3 动 物 细 胞 结 构 示 意 图 4 荧光探针的分类 按照荧光探针制作方式 化学荧光探针: 化学方法合成的 基因荧光探针: 可遗传、由DNA编码、蛋白质组成的 按照荧光探针功能来分 ……. 5 基因荧光探针 荧光基因探针 绿色荧光蛋白 Green Fluorescence Protein 最 早 ， 绿 色 荧 光 蛋 白 （ GFP ） 是 由 Shimomura 等人在研究水母发光蛋白 时 发 现 的 ， 水 母 发 光 蛋 白 是从 水 母 Aequorea 中得到的一种有生物活性发 光蛋白质。 6 基因荧光探针 绿色荧光蛋白的生物化学特征 238个氨基酸组成。 吸收峰395nm 发射波长508nm 稳定性：65℃、pH11、 1%SDS、6mol/L盐酸 胍，或蛋白酶处理几小 时，仍然保持荧光活性。 7 基因荧光探针 绿色荧光蛋白的发光机制 成环反应 A 氧化 8 基因荧光探针 光异构化和光漂白 9 基因荧光探针 突变和光谱变化 根据荧光基团组成： 野生型、酚阴离子型(GFP- S65T) 、中性酚型(Sapphire)、 YFP 、CFP、BFP、苯基型 颜色： 蓝色BFP、青蓝色CFP、绿色 GFP、黄色YFP 10 基因荧光探针 （引自Cubitt,A.B.,1999 ）