Tema12. Obtención y análisis de datos cinéticos.ppt

Tema: 12. Obtención y análisis de datos cinéticos. 1. Integración de la ecuación de Michaelis-Menten: 1.1. Orden cero de reacción 1.2 . Orden uno de reacción 1.3. Orden mixto de reacción 2. Linearización de la ecuación de Michaelis-Menten: 2.1. Representación de dobles inversos o de Linenweaver-Burk. 2.2. Representación de Hanes 2.3. Representación de Eadie-Hofstee. 2.4. Representación lineal directa o representación de Einsenthal y Cornish-Bowden 1. Integración de la ecuación de Michaelis-Menten: Estudio de acuerdo con el orden de reacción Dependencia de la velocidad con respecto a la [S] 1.1. Orden cero de reacción SKm 10 veces la Km Integrando entre So y St y entre 0 y t Permite comparar cantidades totales de enzima Vmax1= kcat [E01] Vmax2= kcat [E02] La razón de las cantidades de enzima es proporcional a la razón de velocidades máximas o de las actividades enzimáticas obtenidas experimentalmente Comparar cantidades de una misma enzima de un tejido o en circunstancias metabólicas diversas, diferenciación, patologías, etc 1.2. Orden uno de reacción SKm A concentraciones 1/10 Km Integrando entre S0 y St Conociendo cantidad incial de enzima [Eo] puede obtenerse la constante de especificidad (kcat/Km) Obtener el valor de Vmax/Km 1.3. Orden mixto de reacción S ≈ Km Dividiendo los dos términos por Km y por t Vmax Linearización de la ecuación integrada de M-M a S ≈ Km Estudiando el avance de una sola reacción cuando estamos en orden mixto se pueden obtener: Vmax y Km Para obtener los parámetros cinéticos de una enzima lo que solemos hacer es obtener la velocidad inicial, v, a diferentes concentraciones de S. v frente a [S] Lo primero es obtener los correspondientes parámetros cinéticos. 2. Linearización de la ecuación de Michaelis-Menten v [S] Vmax P Imaginemos que estamos estudiando una reacción S ? P catalizada por una enzima E, y que obtenemos los siguientes resultados: [S