乙肝五项演示教学.ppt

乙肝病毒五项检测 03 乙型肝炎病毒表面抗原 样本要求 本试剂使用样品为人血清或血浆，含有EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。 不能检测含叠氮钠、悬浮纤维蛋白或聚集物、重度溶血的样品。 样品中应无微生物，可在2~8℃储存一周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。 使用前请将样品室温平衡30分钟以上，冷冻样品实验前需混匀。 乙型肝炎病毒表面抗原 检验方法 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照孔3孔，阳性对照孔2孔和空白对照孔1孔。（用双波长检测，可不设空白对照孔）。 稀释：每孔加入样品稀释液20 μL，空白对照孔除外。 加样：分别在相对应孔中加入待测样品或阴性、阳性对照100μL，轻轻振荡混匀。（非常重要） 温育：用封板膜封后，置37±1℃温育60±2分钟。（如有酶联反应加速仪温育时间可减半）。 加酶：每孔加入酶标试剂50μL，空白孔除外，轻轻振荡混匀。 温育：用封板膜封后，置37±1℃温育30±1分钟。（如有酶联反应加速仪温育时间可减半）。 洗版：小心揭掉封板膜，用洗板机洗涤5遍，拿出来在扣在洗版纸上重重拍干。 显色：每孔加入显色剂A、B液（底物）各50μL，轻轻振荡混匀，37±1℃避光显色30分钟。 测定：每孔加入终止液50μL，轻轻振荡混匀，十分钟内测定结果。设定酶标仪波长于450nm处（建议用双波长450um/600~650nm），用空白孔凋零点后测定各孔A值。 乙型肝炎病毒表面抗原   乙型肝炎病毒表面抗原 注意事项 本样品仅用于体外诊断，操作应按说明说严格进行。封板膜不能重复使用，不同批号、酶标试剂和阴性对照不可混用，不能与其它厂家试剂混用。 避免在有挥发性物质及次氯酸类消毒液（如84消毒液）的环境下操作。 使用前请将试剂平稳至室温（平衡30分钟以上），实验前将试剂轻轻振荡混匀，使用后立即回放2~8℃。未用完的微孔板条与干燥剂一起用自封袋密封2~8℃保存。过期试剂请勿使用。 加液时必须用加样器，并经常校对加样器的准确性。加入不同样品或不同试剂组份时，应更换加样器的吸头和加样槽，以防止出现交叉污染。 洗涤时各孔均匀需加满洗液，防止孔内有游离酶不能洗净。使用洗板机应设定30~60秒浸泡时间。在洗版结束后，必须立即进行下一步，不可使用酶标板干燥。避免长时间的中断实验步骤，以确保每孔实验条件的均一。 结果判定必须以酶标仪读数为准。读取结果时，应擦干酶标板底部，且孔内不能有气泡。不要触碰孔底部的外壁，指引或划痕可能影响板孔的读值。 所有样品、废液和废弃物都应按照传染物处理。终止液为硫酸，使用时必须注意安全。 显色时必须先加显色剂A液后再加显色剂B液，以免显色过低。 由于ELISA反应原理的限制，本试剂检测阴性并不排除HBV（乙型肝炎）感染的可能。检测的阳性结果必须结合临床信息进行分析。 乙型肝炎病毒表面抗体 【检验原理】 本试剂采用双抗原夹心酶联免疫吸附实验原理。在微孔条上预包被乙肝表面抗原（HBsAg），加入待测样品及酶标抗原（HBsAg-HRP）试剂进行温育。样品中的HBsAb与包被抗原和酶标抗原形成“包被抗原-抗体-酶标抗原”复合物。洗板后加入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生成蓝色产物，终止反应后为黄色。若样品中午乙型肝炎表面抗体时，不显色。 乙型肝炎病毒表面抗体 【检验方法】 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20稀释。 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照2孔和空白对照1孔（用双波长检测，可不设空白对照孔）。 加样：分别在相应孔中加入待测样品及阴、阳性对照各50ul。 加霉：每孔加入酶标试剂50ul，空白孔除外，轻轻震荡混匀。 温育：用封板膜封板后，置于37℃温育30分钟。 洗涤：小心揭掉封板莫，用洗板机洗涤5遍，最后一次尽量扣干。 显色：每孔加入显色剂A、B液各50ul，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟。 测定：每孔加终止液50ul，轻轻震荡混匀，10分钟内测定结果。 乙型肝炎病毒e抗体 检验原理：本试剂采用竞争抑制酶联免疫法吸附法实验原理，在微孔板上预包被乙肝e抗原，加入待测样品及酶标抗体（HBeAb-HRP）试剂进行温育，酶标抗体和样品中的HBeAb竞争酶标板上的包被抗原。若样本中无乙型肝炎e抗体时，酶标抗体与包被抗原结合形成“包被抗原-酶标抗体”复合物，洗板后加入显色剂（TMB），复合物上连接的HRP催化显色剂反应，生产蓝色产物，终止反应后变为黄色。若样本中存在乙型肝炎e抗体时，会与酶标抗体竞争形成“包被抗原-抗体”复合物，不显色。 乙型肝炎病毒e抗体 检验方法： 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 编号：将样品对应微孔板按序编号，每板应设阴性对照3孔，阳性对照