医学微生物学实验演示教学.ppt

1、相似的形态染色—从形态上无法区别 中等大小的G-杆菌 多有鞭毛、菌毛 肠道杆菌的生物学性状 2、活泼的生化反应 肠道杆菌的生物学性状 乳糖发酵试验 初步鉴别肠道致病菌和肠道非致病菌 肠道致病菌 肠道非致病菌 多数不发酵乳糖 多数发酵乳糖 肠道杆菌的生物学性状 -/+ - + 伤寒杆菌 - - + 痢疾杆菌 - ⊕ ⊕ 大肠杆菌 硫化氢 乳糖 葡萄糖 菌名 将粪便标本以分区划线法接种到SS培养基。 (每个实验室8个平板） (接种好后，做好标记，用胶布按班绑好) 放入37℃温箱中培养24小时。取出放4℃冰 箱中保存备用。 分离培养方法 三、消毒灭菌（2学时） 1. 细菌在自然界的分布及理化因素 对细菌的影响 2. 高压蒸汽灭菌法 空气中细菌的检查（每个班1个平皿） 原理：根据空气中携带有微生物气溶胶（以固体或液体微小颗粒分散于空气中的分散体系称为气溶胶，其中的气体是分散介质）粒子在地心引力的作用下，以垂直的自然方式沉降到琼脂培养基上。 方法：在室内选择一处放一个平皿。揭开皿盖，皿盖扣置于皿底下，暴露放置15min，即盖上皿盖，放入37 ℃ 培养24小时，观察结果。 1.1 细菌在自然界的分布 1.2.1紫外线对细菌的影响（每个实验室1个培养皿） 原理：紫外线主要作用于DNA，使一条DNA链上的两个相邻胸腺嘧啶以共价键结合成二聚体，从而干扰DNA的复制与转录导致细菌变异或死亡。对病毒也有破坏作用。 紫外线杀菌作用强，而穿透能力弱。普通玻璃、纸张、水蒸气、尘埃等均能阻挡。 紫外线中波长为240-300nm者具有杀菌能力，其中265-266nm的杀菌作用最强。 常用于消毒物体表面，手术室无菌实验室，传染病房的空气消毒及不耐热物品消毒。 1.2理化因素对细菌的影响 紫外线对细菌的影响 取一个平皿，用密涂法将细菌涂布于培养皿中，然后按图所示揭开平皿盖，置于紫外线下照射30分钟，然后盖好盖子，置37℃培养24h后取出观察结果。 1 促进菌体蛋白质变性或凝固。 2 干扰细菌酶系统和代谢。 3 损伤细菌的细胞膜，影响细菌的化学组成，物理 结构和生理活动，从而发挥防腐、消毒至灭菌作用。 1.2.2化学消毒剂对细菌的影响 有些化学药品浓度高时能杀灭病原微生物， 称为化学消毒剂； 浓度低时能抑制细菌生长，称为防腐剂； （只能外用，对细菌的敏感性不同） 化学消毒剂对细菌的影响 医学微生物学实验 　　 检测内毒素的方法有家兔发热法和鲎（hòu）实验法，家兔发热法比较烦琐，且灵敏度不高，故现在多用鲎实验法，鲎实验法灵敏度高，可检测小于10ng/ml的内毒素。 内毒素生物学活性：致热作用、白细胞反应、感染性休克 和DIC等。 原理： 鲎是一种海洋节肢动物，其血液中含有一种有核变形细胞，这种细胞的胞浆中含有凝固酶原和凝固蛋白原。 内毒素（LPS） 　激 活 凝固蛋白原 凝固蛋白 （溶解状态） （凝胶状态） 凝固酶原 凝固酶 材料： 鲎试剂 内毒素试剂 鲎试剂专用溶解水 无菌无热源质吸管 方法： （每4个人一组，两支鲎试剂，一支实验一支对照） 1.取两支鲎试剂打开，分别加入0.1ml 鲎试剂溶解水，使之溶解 2.其中一支加入0.1ml内毒素，标记上实验组，另一支加入0.1ml溶解水，作为对照 3.垂直放入37℃温箱，20--30分钟观察结果 结果： 实验组出现凝固，对照组不出现凝固 内毒素检测的应用： （1）检测输液用品或生物制品中是否 含有内毒素 （2）临床上检测患者是否有革兰氏阴性 菌感染引起的内毒素血症（内毒素 休克）等 二. 肠道致病菌的分离培养 2学时 一.常见培养基的特性及用途 二.致病性肠道杆菌的生物学性状 三.分离培养方法 肠道细菌的分离培养 一、培养基 概念:是人工配制的专供微生物生长繁殖的混合营养物 制品。 成分：充足的营养物质（水分、碳源、氮源、无机 盐）；合适的 PH，适宜