reach法规 第四卷译稿-4.doc

B.1 三步法 急性毒性 (口饲) –急性毒性等级方法 1. 方法 1.1. 引言 急性毒性分级方法给危险性评估和危险性分类提供信息。 基于研究的结果,这种方法使用三份固定的剂量使一个化合物被足够地分开以至能够分类。 此外，在这一个测定方法中被描述的实验步骤允许选择使用三个附加的固定剂量。它们可以也被当作假设结论的选项，又可以用作更进一步的选项。在更进一步的改良值得去做或需要去做的情况下，我们将考虑附加药剂的使用。 方法使用定义了初始剂量，但这并不意味着计算精确可达到 LD50。相反，由于动物样品的死亡是整个实验的终点，当死亡可以预料时，超出一定范围的剂量也是允许的。 实验的结果应该允许根据附件Ⅵ 标准来分类。依据这种方法持续性，测定的时间可以比B.1中描述的要长。这种方法的主要优点是，它所需的动物数量比急性毒性（口饲）（B.1）和选择性固定剂量方法（B.1 两步法）要少。 也见一般引言 B部分 。 1.2. 定义 见一般引言B部份。 1.3. 测定方法原理 对一组实验动物通常使用一种改良了的剂量，使用渐进的实验步骤来测定实验物质的性质。每一步使用同性别的三只动物。没有必要进行实验前的光照研究。关系到动物死亡率的物质缺少或存在的剂量使用取决于上一步的剂量，例如： 没有必要进行更深一步的测定 下一步，药剂的剂量没有改变，但被用于另一种性别的动物 下一步，将使用下一个更高或更低的剂量水平 1.4. 测定方法的描述 1.4.1. 随机选取健康年轻的动物，标上记号以示区别，为了让它们熟悉环境，还得在测定前五天把它们关进笼子里。这些动物可以根据性别和剂量水平进行划组归笼，但每个笼子里面动物不能太多以至干扰了对每个个体的清晰观察。 测定物质以确定的剂量用胃管或插管强食地注入动物体内。 如果需要，测定物质要被溶解或悬浮在合适的媒介物质中。建议只要可能的话，首先考虑用水，再考虑用油或其他媒介物。对于非水溶性测定物，在测定前必须知道或确定媒介物的毒性。 动物在使用剂量前应该禁食；但水要保证供给。 1.4.2. 测定条件 1.4.2.1. 测定动物 除非有禁忌症，一般老鼠是常用的啮齿动物。雌性必须是未生育的和没有怀孕的。 在研究的开始阶段，每种性别的体重差别不得超过平均水平的20%。 1.4.2.2.数量和性别 每一步骤用同性别的三只动物. 在开始，性别可以任选。 1.4.2.3.剂量水平 使用的初始剂量是从三个确定的水平里选择的，如25, 200 和2000mg/kg .而且初始剂量应该有利于导致部分样品的死亡。在附件Ⅰ里面描述的操作流程也可以依据初始剂量做相应的参考文献。 对于性别和初始剂量的选择，应该利用所有可用的信息，包括组织活性相关的信息。当结果显示死亡并不是出现在最大使用剂量时，就应该进行限制的测定。如果不了解被测定物质的情况，出于动物生存着想，建议使用200 mg/kg的初始剂量。 有时，非常需要得到比确定剂量水平更高的精度，在这种情况下，就需要考虑额外的剂量水平如5，50 或500 mg/kg等。 由于腐蚀性或严重的刺激性反应能引起明显的痛苦的剂量无需实施。 处理组之间的时间间隔在毒性迹象的初始，中期和最严重时分别测定。其他性别的动物或下个剂量的处理要延迟直到我们相信前一个剂量下的动物能存活下来。 1.4.2.4.极限测定 在一个药剂等级中，两组异性动物（每组3只）需要消耗至少2000mg/kg的试剂。若出现与化合物有关的死亡，则需考虑进一步消耗200mg/kg的试剂来测定。 1.4.2.5.观察期 观察期需延续至少14天，除非动物已死或者需要中止研究并人道宰杀。当然，其长度并非严格规定的，需就实验中毒发反应、开始毒发的比率以及康复期的长度等具体情况作适当调整。毒发开始及结束、出现死亡的时刻十分重要，特别是当中毒反应的出现有延迟的迹象时。每一只动物样品的观察结果需独立地、系统地记录下来。 1.4.3.　实验步骤 在测定动物样品的禁食期过后称重，再使其与测定物质接触，接触过后，3－4小时内动物不得进食进水。如果药剂是连续分批提供给动物样品的，则视接触期的长度以供给动物食物。 一次提供给动物样品的液态药剂的最大量由动物样品的体格大小决定。供给啮齿类动物，用量通常不超过1ml/100g；如果是含水的溶液，则2ml/100g也可行。应通过调节药剂浓度来将所需药剂量的变化降至最低，以保证所有药剂浓度等级的量恒定。若不能一次性提供给动物以药剂，则可以分批供给，但供给期不得超过24个小时。 测定步骤的细节参看附录1。 1.4.3.1.　总体观察 与药剂接触的当天至少需要对测定动物进行两次详细地临床观察，在动物有反应的当天需要进行更多次的临床观测，之后每天起码一次。垂死的以及呈现出持续经历剧痛的动物需被人道无痛宰杀。人道宰杀的动物也被视为测定