土壤中分解尿素细菌分离与计数-课件.pptVIP

◆应在火焰旁称取土壤10g。 ◆在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行 （三）样品的稀释 ㈣.取样涂布 ◆实验时要对培养皿作好标记。注明培养基类型、培养时间、稀释度、培养物等。 分离不同的微生物采用不同的稀释度 稀释倍数 目的 细菌 104、105、106 保证获得菌落数在30～300之间、适于计数的平板 放线菌 103、104、105 真菌 102、103、104 原因：不同微生物在土壤中含量不同 ㈤.微生物的培养与观察 在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。 培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。 之后讲课本P22的最上面内容 讲完第1点后讲课本P22中间楷体字内容引出2、3、4、内容 讲完后讲P23楷体字部分 微生物的类群 原生生物： 原核生物: 真菌: 病毒: 如酵母菌、霉菌、食用菌 单细胞的动植物 如草履虫、单细胞藻类等 无细胞结构 真核细胞 细菌、蓝藻 原核细胞 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 专题二 微生物的培养与应用 课题背景 尿素{ CO(NH2)2 }----重要的农业氮肥。只有被土壤中的细菌分解成NH3之后才能被植物吸收利用。 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 我们吃的是尿素， 吐的是作物需要的“奶” 尿素细菌 课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样 的细菌 研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 1、实例：寻找耐高温的DNA聚合酶 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的 要求，到相应的环境中去寻找。 寻找 寻找 耐高温的酶 耐高温生物 耐高温环境 （热泉、火山口） PCR技术：要求使用耐高温（93度）的DNA聚合酶 ㈠.筛选菌株 2、实验室中微生物的筛选原理： 人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 利用选择培养基 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 3、所需培养基： ①从物理性质看此培养基属于哪类？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 4、此培养基能选择分解尿素的微生物的原理 5、怎样证明此培养基具有选择性呢？ 以尿素为 唯一氮源 的培养基 牛肉膏 蛋白胨 培养基 ?是 分离 尿素 细菌 判断该 培养基 有无选 择性 实验组 对照组 培养基类型 是否 接种 ?目的 ?结果 只生长尿素细菌 生长多种微生物 是 1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ㈡.统计菌落数目： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点： 2.间接计数法（活菌计数法） ⑴原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。 ⑵常用方法：稀释涂布平板法。 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(ml)，M代表稀释倍数。 注意事项 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 设置对照的主要目的是排除实验 组中非测试因素对实验结果的影 响，提高实验结果的可信度。 ㈢.设置对照： 实例：在做分解尿素的细菌的筛选与统计菌 落数目的实验时，A同学从对应的106 倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌 落，但是其他同学在同样的稀释度下 只选择出大约50个菌落。分析其原因。 原因：⑴土样不同， ⑵培养基污染或操作失误 (或者是混入了其他的含氮物质) 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验