实验研究鲁氏耶尔森菌感染虹鳟鱼的进入路线与组织分布(英译汉).docVIP

实验研究鲁氏耶尔森菌感染虹鳟鱼的进入路线及组织分布 摘要：鲁氏耶尔森菌是红口石鲈肠道疾病的病原体，它给全世界水产养殖鲑鱼行业带来了重大的损失。尽管这种疾病有很大的重要性，但是有关该疾病的现有可用的发病机制资料却很少。在这项研究中，采用不同4种鲁氏耶尔森氏菌株接触感染虹鳟鱼的方法来进行研究感染入口。细菌学和组织学检查发现，鲁氏耶尔森菌在内部器官迅速传播感染后，鳃中出现了大量细菌。但是，只有致病性株是能够生存和繁殖在寄主上，导致感染败血症，并在数天之后死亡。这些结果表明，鳃可能是一个重要的入口，而鲁氏耶尔森菌的致病性与免疫逃避有关。 关键词：鲁氏耶尔森菌 感染入口 致病性 虹鳟鱼 引言 鲁氏耶尔森菌病原体是耶尔森氏鼠疫杆菌肠道病或红口石鲈肠道疾病（ERM）的病原体，它给全球范围内的鲑鱼养殖造成了重大的损失。虽然感染这种病原体的情况在其他鱼类中已经有所报导，鲑鱼（尤其是虹鳟）是最容易被ERM感染的(Furones et al. 1993)。感染可能会导致在体表和内部器官出现大出血的慢性或急性败血症。 尽管ERM很重要，但人们对鲁氏耶尔森菌能够战胜宿主防御和引起疾病的确切致病机制却知之甚少。而鲁氏耶尔森菌株之间的不同的致病性已经有所研究记录，主要是通过腹腔和肌肉注射以及接触曝光进行的。(Davies 1991, Romalde Toranzo 1993, Austin et al. 2003, Fouz et al. 2006). 但是，这后者的方法，似乎是一个更加可靠和有效的感染模型，它尽可能准确地模仿自然感染的条件，并可确保位于体表面的免疫机制发挥他们的作用。然而，它尚未确定何时以及虹鳟鱼如何被鲁氏耶尔森菌感染，以及细菌驻留在被感染鱼的位置。 这次研究的目的是揭示鲁氏耶尔森菌感染虹鳟鱼的入口路线(实验 1)，并探讨在感染不同的4种鲁氏耶尔森菌后，不同的时间间隔(实验2)，它的组织分布情况。进行了额外的实验感染（实验3a和3b），以确定是否有不同的组织分布与致病性的差异。由于已知温度对虹鳟鱼免疫相关的功能有影响，在2种不同温度条件下，进行了鲁氏耶尔森菌的致病性研究。 (Nikoskelainen et al. 2004, Fernández et al. 2007). 1 材料和方法 细菌菌株：在实验中，我们用4种不同的鲁氏耶尔森菌株。菌株5最初是于2001年在英国，从虹鳟鱼的养殖中出现临床症状的ERM中分离出来的，后来从水产养殖研究所获得(Stirling, Scotland)。菌株 17.00(2-1) 和 E842-95 是L’Institut National de la Recherché Agronomique 提供的(INRA, Paris, France)。从虹鳟鱼中分离出的菌株17.00（2-1）无临床症状。没有任何背景资料关于应变E842-95的可用。CCUG 14190菌株类型是从哥德堡大学（瑞典）的菌种保藏中获得的，它是从带有ERM的虹鳟鱼中分离出来的。所有的菌株都属于血清型O1a除了鲁氏耶尔森菌E842-95，这是一个血清型O1b 菌株，是被J. L. Romalde 区分出来的(Universidad de Santiago de Compostela, 菌株储存的悬浮液被储存在-70°C。在解冻后，一夜之间，在 20° C下，用5%羊血 (blood agar)，细菌被种植哥伦比亚琼脂 (Oxoid)上。菌落是从琼脂平板取来的，在 动物：我们获得的30，81，85和120虹鳟鱼的这4个批次(实验 1, 2, 3a and 3b)，重达6至45克，22至55克，3至20克和8至60克，分别从没有ERM疾病历史的养鱼场Gérouville, Belgium)得到的。鱼被驯化10天，维持在1000升罐，用循环自来水过滤。它们每天被饲喂商业饮食 (Vijver Visvoeder).。 为确保动物们容易感染鲁氏耶尔森菌，牺牲了10%的每个新引进的批处理的鳟鱼。来自鳃、肠、肝、肾、脾的样本都要做细菌化验。 此外，每次实验开始前，样本分别取自2个随机选择的鱼的皮肤，鳍和鳃，然后对外部寄生虫进行微观评价。鲁氏耶尔森菌从任何样本的血琼脂培养基上分离出来的，所有鱼类都没有外部寄生虫病。 实验感染：所有的感染试验都获得了根特大学兽医医学学院的伦理委员会的批准(EC2005/73, EC 2007/094, EC 2008/026)。 在 实验 1，6鱼的这组是同浴挑战，无论是鲁氏耶尔森菌株5, 17.00(2-1)，CCUG 14190 还是 E842-95 （总共4组)，最后的浓度约2 × 108 CFU ml–1.。 经过1小时曝气水族馆在18°C下的接触曝光后，鱼被再次转移到他们的