培养细胞增长模式的特征何时时行继代培养细胞密度.PDF

传代即去除原培养基并将细胞从原培养体系转移到新鲜的生长培养基中，该过程可使细胞系或细 胞株进一步增殖。 培养细胞增长模式的特征 接种后培养细胞的生长将从延滞期进入对数期，即细胞呈指数增殖。 当贴壁培养的细胞已占据 所有可用基质、没有扩增空间，或者悬浮培养的细胞已超过培养基所能支撑的能力，无法进一步 生长时，细胞增殖速度将大大降低甚至完全停止 (参见下方的图4.1) 。 为了将细胞密度维持在 最佳水平，以便细胞继续生长，并且刺激其进一步增殖，必须将培养物分成若干部分，并添加新 鲜培养基。 图4.1： 培养细胞增长模式的特征。 半对数图形显示了细胞培养密度对培养时间的关系。 培养基中的细胞通常以标准生长 模式增殖。 细胞接种后第一个生长阶段是延滞期，此阶段细胞生长缓慢，处于适应培养环境、为快速生长做准备的状态。 延 滞期之后是对数期，此阶段细胞呈指数增殖，消耗生长培养基中的营养素。 当所有生长培养基均被耗尽 (即：一种或多种营 养素耗竭) 或者细胞已占据所有可用基质时，细胞即进入静止期 (即：平台期)，其增殖速度大大降低甚至完全停止。 何时时行继代培养？ 对于贴壁培养和悬浮培养而言，判断是否需要传代的标准大致相同；但是，哺乳动物和昆虫细胞 系之间存在一些差异。 细胞密度  哺乳动物细胞：贴壁培养的细胞应该处于到达汇合点之前的对数传代阶段。 正常细胞达到 汇合状态时会停止生长 (接触抑制)，重新接种后需要较长时间才能恢复。 转化细胞即使达 到汇合状态也能继续增殖，但是在经过大约两个倍增时间后通常会变质。 类似地，悬浮培 养的细胞进入对数生长期、未达到汇合状态时也应进行传代。 达到汇合状态时，悬浮培养 的细胞会聚集成团块，转动培养瓶时培养基会变得浑浊。  昆虫细胞：昆虫细胞在处在到达汇合点前的对数期亚传代阶段。 牢固贴壁的昆虫细胞达到 汇合状态时也可传代，虽然此时细胞更容易从培养容器上解离下来，但是如果反复将昆虫细 胞在密度超过汇合的状态下传代，细胞的倍增次数会减少，活力会降低，贴壁能力也会下降。 另一方面，将贴壁培养的昆虫细胞在达到汇合状态前传代需要较大的机械力，才能使细胞从 单细胞层中脱离。 反复在达到汇合状态前传代，会导致细胞倍增次数减少，活力降低，健 康度较差。 培养基耗尽  哺乳动物细胞：生长培养基pH 值降低通常表示乳酸蓄积，乳酸是细胞代谢的副产物。 乳 酸对细胞有毒性，低pH 值对细胞培养并不是值得推荐的办法。 pH 值改变的速度通常取 决于培养体系中的细胞浓度，细胞浓度越高，培养基耗竭的速度越快。 如果发现pH 值迅 速降低 (0.1 – 0.2 pH 单位)，同时细胞浓度增大，则应对细胞进行传代。  昆虫细胞：用于昆虫细胞培养的生长培养基通常比哺乳动物细胞培养基酸度大。 例如， 用于Sf9 细胞培养的TNM-FH 和Grace 培养基的pH 值为6.2 。与哺乳动物细胞培养过程 不同，昆虫细胞生长时培养基的pH 值会逐渐升高，但一般不会超过6.4 。但是，与哺乳动 物细胞一样，昆虫细胞达到较高密度后生长培养基的pH 值也会开始降低。 继代培养时间表 严格按照预定时间进行细胞传代可确保细胞的生物学行为稳定，便于监测其健康状态。 从某一 接种密度开始逐渐调整细胞接种密度，直到达到适合该细胞的稳定生长速度和产量。 细胞偏离 如此确定的生长模式通常表示细胞健康状况不佳 (例如：变质、污染) 或者培养体系的某一组分 功能异常 (例如：未达到最佳温度，培养基过于陈旧)。 我们强烈建议您保留详细的细胞培养记 录，记录加料和传代时间、所用培养基种类、解离方法、分种率、形态学观察结果、接种浓度、 产量和抗生素用法。 最好按照传代时间安排开展实验和其它非常规操作 (如更换培养基种类)。如果您的实验安排与 常规传代时间安排不吻合，则应确保当细胞仍处于延滞期或者已经达到汇合状态、停止生长时， 不进行传代。 推荐用于普通细胞株的培养基 许多哺乳动物连续细胞系均可采用相对简单的培养基 (如添加了血清的MEM 培养基) 进行培养， 而采用MEM 培养基培养的细胞同样也可采用DMEM 或培养基199 进行培养。 但是，当表达 特异功能时就可能需要更复杂的培养基。 有关为某种细胞选择合适培养基的信息通常可通过发 表的文献以及提供细胞的机构或者细胞库获得。 如果无法找到关于您的细胞该选择何种培养基的信息，您可根据经验选择生长培养基和血清，或 者测试几种不同的培养基，以获得最佳结果。 通常，贴壁细胞培养最好