原生质体融合的操作技术.PDF

篇名 原生質體融合的操作技術 作者 余涵茵。市立瑞祥高中。二年二班 大綱 壹˙前言 貳˙正文 一.原生質體之分離－由矮牽牛花與葉片分離 二.原生質體之收集純化 三.原生質體融合 參˙結論 一.實驗照片、實驗發現 二. 心得 肆˙引註資料 PDF created with pdfFactory trial version 壹˙前言 由植物活細胞中除去細胞壁稱為原生質體(protoplast) 。目前利用原生質體的培 養、增殖、分化來利用當作品種改良的手段或 原生質體融合或是遺傳物質的輸 入甚至於光合作用的研究之上。原生質體 除了染色體DNA 之外的環狀小DNA 分子，故亦具有基因 。那在遺傳工程技術中 ，又是扮演著什麼樣的角色呢？ 貳˙正文 一.原生質體之分離－由矮牽牛花與葉片分離 01.實驗器材 鑷子、剪刀、Millipore 、6cm 塑膠培養皿、15ml 離心管、50ml 燒杯、注射針筒 、 parafilm 、pH meter 、酵素液（1/4MS 、cellulose 、macerozyme 、sucrose 、T.P.N 、 inositol 、0.45M mannitol ）、washing medium （154mM NaCl ；125mM CaCl2 ；5mM KCl ；5mM glucose ）、70%酒精 02.實驗步驟 A.酵素液之配製 a.依照適當比例,將 1/4MS 、cellulose 、macerozyme 、sucrose 、T.P.N 、inositol 、0.45M mannitol 置於燒杯中,混合均勻（需攪拌1~1.5 小時）,調整pH 值到5.8 。 b.在無菌操作台中,將酵素液以Millipore 過濾,置於6 ㎝的無菌培養皿中。 B.無菌苗製備 a.取適當之花朵或葉片,以70%酒精消毒 。 b.將花朵 、葉片剪成羽毛狀 。 c.將葉片平鋪置於酵素液中。（注意：以酵素液接觸到材料為主）。 PDF created with pdfFactory trial version d.以parafilm 封住培養皿 。 e. 60rpm （dark,27℃,overnight ）。 二.原生質體之收集純化 01.實驗器材 小漏斗、15ml 離心管、玻璃吸管、尼龍網、washing medium （154mM NaCl ；125mM CaCl2 ；5mM KCl ；5mM glucose ）、25% sucrose solution 02.實驗步驟 A.將進行原生質體培養之培養皿剝去parafilm 。 B.在15ml 離心管插上附有尼龍網之小漏斗 。 C.打開培養皿之蓋子,傾斜培養皿,撥開碎片。 D.以玻璃吸管吸