GB/T 16286-1996食品中蔗糖的测定方法　酶-比色法.pdf

GB/T16286-1996 前 言 食品中蔗糖的测定方法，一般采用盐酸水解法。由于盐酸水解蔗糖过程中，还有其他糖类被水解为 还原糖，导致测定结果偏高。本标准采用的酶一比色法是在检索了近20年148篇国外文献的基础上，经 过反复实验、验证而制定的。由于酶法具有高度的专一性(R-果糖昔酶只能催化蔗糖转化为葡萄糖和果 糖)，灵敏度高，操作简便，因此测定结果准确。 蔗糖酶解后的产物— 葡萄塘的测定方法，与GB/T16285-1996保持一致。 本标准的附录A是标准的附录。 本标准由全国食品工业标准化技术委员会提出并归口。 本标准起草单位:中国农垦北方食品监测中心。 本标准经全国食品工业标准化技术委员会秘书处审核。 本标准主要起草人:张宗城、刘宁、郝I 中华人民共和国国家标准 食品中蔗糖的测定方法 Gs/T 16286一1996 酶一比色法 Methodfordetermin.tionofsucroseinfood- Enzyme-colorimetrkmethod 1范围 本标准规定了用酶一比色法测定食品中蔗糖的方法。 本标准适用于各类食品中蔗糖的测定。 本标准最低检出限量为。04Kg(蔗糖/mL(试液)。 2 原理 在件果糖昔酶(各FS)催化下，蔗糖被酶解为葡萄糖和果糖。葡萄糖氧化酶(GOD)在有氧条件下，催 化各D-葡萄糖(葡萄糖水溶液状态)氧化，生成D-葡萄糖酸-s-内酷和过氧化氢。受过氧化物酶(POD)催 化，过氧化氢与4-氨基安替比林和苯酚生成红色酿亚胺。在波长505nm处测定酿亚胺的吸光度，计算 食品中蔗糖的含量。 C,2H22011+H20士月三C,H,206(G)+C6H,A(F) Cco,HH,A:0。((GG))++O0Z。-t塑址,H,o06+-11202 H202+C,H,OH+CHN,O坚聚c6H,NO+H20 3 试剂 31组合试剂盒 1号瓶:内含详果糖普酶(rfuctosidase)400U(活力单位)、柠檬酸、柠檬酸三钠; 2号瓶:内含。2mol/L磷酸盐缓冲液(pH=7.6)200mL，其中含4-A基安替比林0.00154mol/L; 3号瓶:内含。.022mol/L苯酚溶液200ml.; 4号瓶:内含葡萄糖氧化酶(glucoseoxidase)S00U(活力单位)、过氧化物酶(辣根，peroxidase) 2000U活力单位)。 1,2,3,4号瓶须在4℃左右保存。 3.2 酶试剂溶液 3.2.1将1号瓶中的物质用重蒸馏水溶解，使其体积为66mL，轻轻摇动(勿剧烈摇动)，使酶完全溶 解。此溶液即为卜果糖普酶试剂，其中柠檬酸(缓冲溶液)浓度为0.1mol,/L,PH=4.6。在4℃左右保存， 有效期一个月。 川 将2号瓶与3号瓶中的溶液充分混合。 2 3 3 . 将4号瓶中的酶溶解在3.2.2混合液中，轻轻播动(勿剧烈摇动)，使酶完全溶解，即为葡萄糖氧 化酶一过氧化物酶试剂溶液。在4℃左右保存.有效期一个月。 国家技术监督局1996一04-10批准 199一12一01实施 GB/T16286一1996 3.3 。·085mol/1亚铁氰化钾溶液 称取3.7g亚铁氰化钾仁K,Fe(CN)fi·311,O,GB1273.分析纯〕，溶于100m工重蒸馏水中，摇匀 3.4 。·25mot/L硫酸锌溶液 称取7.7g硫酸锌(ZnSO,·7H,O,GB666，分析纯)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀 3.50.1mol/l.氢氧化钠溶液 称取0.4g氢氧化钠(GB629，分析纯)，溶于100mL重蒸馏水中，摇匀。 3.6 蔗糖标准溶液 称取经10。士2C烘烤2h的蔗塘(HG3-1001，分析纯)0.4000g,溶于重蒸