GB/T 15398-1994饲料有效赖氨酸测定方法.pdf

中华人民共和国国家标准 饲料有效赖氨酸测定方法 GB/r 15398一94 Determinationofavailablelysineinfeedstuffs 本标准参照采用国际标准ISO5510-1984K饲料有效赖氨酸测定方法》。 1 主题内容与适用范围 本标准规定了饲料中有效赖氨酸的测定方法。 本标准适用于含有动物或植物性蛋白质的配合(混合)饲料及单一饲料。 2 引用标准 GB6432饲料粗蛋白测定方法 3 术语 有效赖氨酸是指在规定的测定条件下测得的总赖氨酸和非有效赖氨酸之差。 4 原理 蛋白质中有效赖氨酸的。一氨基可与2.4一二硝基氟苯反应，酸解后生成二硝基苯赖氨酸，而其他非 有效部分则生成赖氨酸 因此将不经二硝基氟苯处理的样品和经由二硝基氟苯处理的样品分别水解，用 离子交换色谱法测定各自的赖氨酸含量，即可由其差值得出样品中有效赖氨酸的含量。 5 试剂和溶液 本标准所用试剂均为分析纯，水为去离子水。 5.1 乙醚(HG3-1002)0 5.2碳酸氢钠(GB640)溶液:80g/L, 5.3 2.4二硝基氟苯(DNFB)乙醇溶液: 将 一定量的DNFB溶于95%乙醇，其体积比为。.15:12，该溶液用前现配 5.4 盐酸(GB622)溶液:6.0mol/I。 5.5 盐酸(GB622)溶液:6.5mol/Lo 5.6 稀释用柠檬酸钠缓冲液:pH约2.2, 将 「列试剂依次溶于适量水: 20g水合柠檬酸(HG3-1108) 8g氢氧化钠(GB629) 16ml浓盐酸((;B622) 0.1ml辛酸 20ml，硫二甘醇 加水稀释至1000nli 国家技术监督局1994门2一30批准 1995一07一01实施 cs/T 15398一94 5.了 层析用柠檬酸钠缓冲液: pH值及配制方法依不同型号的氨基酸测定仪有所区别，请参见仪器说明书配制。 5.8 茹二二酮试剂 按仪器说明书配制。 5.9 赖氨酸标准液:50nmol/mL或其他浓度。 先配制2.5pmol/ml赖氨酸标准贮备液:称取45.6mg赖氨酸单盐酸盐溶于。.1moll_的盐酸 中，稀释至100ml，混匀。 用该标准贮备液或商品2.5pmol/mL的标准氨基酸混合液，以pH2.2柠檬酸钠缓冲液为溶剂配 制50.()nmol/ml标准液。也可根据仪器说明书配制成其他最佳使用浓度。 6 仪器、设备 6门 实验室用样品粉碎机:能快速一致地粉碎样品并能避免样品过热和尽可能少与外界接触。 6.2 样品筛:孔径0.25mm(60目)。 6.3分析天平:感量0.0001go 6.4 油浴:温度可稳定于120^-130℃之间。 6.5 回流水解装置:150ml,,500mL短颈烧瓶以玻璃磨口接头与回流冷凝器(长约35^40cm)相接 6.6离心机:4000r/min 6.7 旋转蒸发器。 6.8 氦墓酸自动分析仪。 6.9 回流水解装置:50mL水解管或消煮管，具磨口接头与回流冷凝器相接。 6.10 金属块消煮炉:要求温度保持在120^-130C之间，必要时可加继电器和接点温度计控制。金属块 内消煮管的受热深度应高于或等于25mL消煮液的液面高度。 6.11 水浴 7 试样制备 采集具代表性的配合(混合)饲料或单一饲料，按四分法缩分制备实验室样品，取10.20g粉碎，使 其全部通过样品筛(6.2)。充分混匀，装入密闭容器 8 分析步骤 8.1 n法 8门.1 总赖氨酸 8门门门 酸水解 称取约含50mg粗蛋白质的样品两份，置于500mL烧瓶((6.5)中，加入250mL盐酸((5.4)，装好回 流冷凝器，置120-130C油浴(6.4)中，使其徐徐沸腾，回流水解24h, 取下烧瓶，冷却。必要时将酸解液(连同水解后不溶物)重新定容至250mL。过滤，吸取5ml-滤液， 于旋转蒸发器(6.7)上，60C左右蒸发至干。加水少许，重复蒸干1-2次。 将残渣溶于5mL稀释用柠檬酸钠缓冲液((5-6)，离心10min(4000r/min)，取上清液上机或贮于 具塞小管中冷藏备用。 8.1