650l反应器悬浮培养bhk21细胞生产兽用狂犬病毒技术.pdf

北京天和瑞生物科技有限公司 650L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞生产兽用狂犬病毒技术 ——适应于BHK21的Flury或ERA毒株 一、技术背景 BHK21细胞是繁殖狂犬病毒的适合宿主。我国公布的《狂犬病活疫苗（Flury 株）制造及检验试行规程》，以及法国维克公司在我国注册的犬/猫用狂犬病灭 活疫苗都是采用BHK21细胞。 目前，国内 BHK21 生产兽用狂犬疫苗生产工艺是用传统的转瓶培养 BHK21 细胞工艺，即将狂犬病毒株（Flury株等）接种单层生长的BHK21细胞，维持培 养 4～5 日，一次性收获、冻融，制备成苗。因每个转瓶均是独立的细胞培养单 元，每瓶的细胞质量、病毒产量和滴度都不同，导致国产狂犬疫苗批间差大，隐 性污染引起高内毒素等缺点。 反应器悬浮培养 BHK21 细胞生产兽用狂犬病毒工艺，不仅能提高 BHK21 细 胞密度，自动监控细胞生长或病毒繁殖时的最适生化条件，提高病毒滴度，而且 工艺规模放大相对容易，疫苗质量稳定、批间小。该工艺将改变目前国产兽用狂 犬疫苗价廉质低的形象。 北京天和瑞生物科技有限公司携手北京清大天一生物技术有限公司，已成 功开发了BHK21反应器悬浮培养基、120L-650L-1200L反应器悬浮BHK21细胞技 术、650L 反应器悬浮培养 BHK21 细胞生产兽用狂犬病毒工艺等关键技术，为反 应器生产兽用狂犬病毒疫苗的产业化奠定了扎实的技术基础。 二、工艺技术 650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒工艺：利用BHK21悬浮 培养基从液氮中复苏已适应悬浮培养的 BHK21 细胞株，种子细胞经摇瓶、5L 反 应器和120L反应器等逐级放大培养，最后在650L反应器中悬浮培养BHK21细胞 至合适密度，接种狂犬病毒种毒，维持一定的溶氧、pH 值、温度等工艺参数， 适时收获狂犬病毒上清,制备成疫苗。反应器收获的狂犬病毒滴度高于转瓶培养 病毒的滴度。 图 1 表示了反应器悬浮培养 BHK21 细胞的照片，细胞密度可以达到 3× 1 北京天和瑞生物科技有限公司 6 10 cells/ml左右以上。 图1 反应器中悬浮培养的BHK21细胞，200X 三、工艺流程 复苏悬浮BHK 细胞株 摇瓶培养BHK 细胞 5L反应器培养 BHK细胞 狂犬病毒种毒库 120L反应器培养BHK细胞 650L反应器培养BHK细胞 经 BHK细胞繁殖的种子毒 650L反应器生产狂犬病毒 收获狂犬病毒上清 配苗 2 北京天和瑞生物科技有限公司 四、 项目技术资料 1. 650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒总结报告 2. 650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒工艺规程 3. 5L反应器悬浮培养BHK21细胞操作规程 4. 120L反应器悬浮培养BHK21细胞操作规程 5. 650L反应器悬浮培养BHK21细胞操作规程 6. 650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒操作规程 7. 650L反应器悬浮培养BHK21细胞生产兽用狂犬病毒技术要点