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- | 1999-11-10 颁布
- | 2000-04-01 实施
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GB/T17999.5-1999
前 言
酶联免疫吸附试验(ELISA)是国外监测SPF鸡淋巴白血病病毒感染的通用方法。我国建立的淋巴
白血病ELISA方法敏感性高、特异性强、重复性好,已广泛用于商品种鸡场淋巴白血病的净化和SPF
鸡场淋巴白血病病毒感染的监测,本标准在此基础上,规定了SPF鸡酶联免疫吸附试验。
SPFA鸟微生物学质量控制国家系列标准,包括SPF鸡微生物学监测总则和9种SPF鸡微生物学检
测方法。本标准为(((SPF鸡 酶联免疫吸附试验》。
SPF鸡微生物学检测方法还包括以下部分:
GB/T17999.1--1999SPF鸡 红细胞凝集抑制试验;
GB/T17999.2-1999SPF鸡 血清中和试验;
GB/T17999.3-1999SPF鸡 血清平板凝集试验;
GB/T17999.4-1999 SPF鸡 琼脂扩散试验;
GB/T17999.6一1999 SPF鸡 胚敏感试验;
GB/T17999.7-1999SPF鸡 鸡白痢沙门氏菌检验;
GB/T17999.8-1999SPF鸡 试管凝集试验;
GB/T17999.9-1999SPF鸡 间接免疫荧光试验。
本标准由中华人民共和国农业部、国家科学技术部提出。
本标准由农业部畜牧兽医司归口。
本标准起草单位:农业部实验动物研究中心。
本标准主要起草人:陈德威、张冰、赵立红、黄进、李军。
中华人民共和国国家标准
GB/T 17999.5一1999
SPF鸡 酶联免疫吸附试验
SPFchicken--Enzyme-linkedimmunosorbentassay
1 范围
本标准规定了酶联免疫吸附试验所用试剂、材料,操作程序及结果判定等。
本标准适用于SPF鸡感染淋巴白血病病毒后的群特异性抗原的监测。
2 原理
检测SPF鸡蛋清中禽白血病病毒主要群特异性抗原P27的方法为双抗体夹心酶联免疫吸附试验。
先用抗P27抗体包被酶标板,然后与蛋清作用,蛋清中的P27与包被抗体结合,洗去未结合的物质。再
加入HRP兔杭P27抗体,作用后洗去未结合的酶标物 加入底物溶液,出现颜色变化。颜色变化的速度
及程度与样品中P27的含量有关
3 试剂和器材
3.1 试剂
3-1门 包被抗体(兔抗P27 IgG),
11.2 RH性抗原(P27)。
3门.3 阴性抗原。
3.1.4 被检蛋清。
3.1.5HRP-兔杭P27o
3.1.6 包被液:
。.05mot/IpH9.6碳酸盐缓冲液配制碳酸钠1.59g,碳酸氢钠2.93g,蒸馏水加至1000MI
3.1.7 洗涤液:
pH7.4,PBS-TWeen20配制,0.01m0I/I_,PH7.4PBS1000mL,吐温-20。.3MI
3,1.8 底物溶液:
pH5.。磷酸盐一柠檬酸缓冲液一OPD-H,O,配制 。.2mol/I磷酸氢二钠溶液25.7mI0.1mot/I
柠檬酸溶液24.3ml,蒸馏水50MI,邻苯二胺(OPD)40mg,30%H,0,0.15ml
I,.9 终止液:2mol/I硫酸。
3.2 器材
3.2.1 酶标板。
3.2.2 移液器。
12.3 恒温培养箱。
3.2.4 FIASA读数仪
4 操作程序
4.1抗体包被 用包被液将免杭P271gG作适当稀释,每孔100pL,4C过夜。
国家质量技术监督局1999一11一,0批准 2000一04一01实施
GB/r17999.5一1999
4.2洗涤:甩去包被液,每孔加满洗涤液(约300pi),静置3min,甩干,如此重复3次
4.3加样:每孔加100pI被检蛋清,设阳性、阴性对照孔,每个样品加两孔,37C作用60min 甩去样
品,洗涤同上。
4.4 侮孔加HRP一免抗P27(工作浓度)100pL,37C作用45min-60min,甩去HRP一兔抗P27液,洗
涤同 卜
4.5 加底物溶液:每孔加100kL新配制的底物溶液,避光作用15min
4.6终止反应:每孔加终
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