生物的技术实验复习题.docx

接种：按无菌操作技术要求将目的微生物移接到培养基质中的过程。 菌苔：细菌在固体培养基接种线上由母细胞繁殖长成的一片密集的、具有一定形态结构特征的细菌群落，一般为大批菌落聚集而成。 无菌操作：是在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其他微生物污染的技术。 革兰氏染色：是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色属复染法。 质粒:是附加到细胞中的非细胞的染色体或核区DNA原有的能够自主复制的较小的DNA分子（即细胞附殖粒、又胞附殖粒） 纯培养：微生物学中把从一个细胞或一群相同的细胞经过培养繁殖而得到的后代。 完全培养基：在基本培养基中添加天然物质后能满足某种微生物各种营养缺陷型的营养要求的加富培养基。 选择培养基：是根据某一种或某一类微生物的特殊营养要求或对一些物理、化学抗性而设计的培养基。利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。 补充培养基：在基本培养基中添加某种营养物质以满足该营养物质缺陷型菌株生长需求的加富培养基。 平板划线法：指把混杂在一起的微生物或同一微生物群体中的不同细胞用接种环在平板培养基表面通过分区划线稀释而得到较多独立分布的单个细胞，经培养后生长繁殖成单菌落，通常把这种单菌落当作待分离微生物的纯种。有时这种单菌落并非都由单个细胞繁殖而来的，故必须反复分离多次才可得到纯种 PCR (聚合酶链式反应）：是指在DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。 梯度洗提层析：利用一定的样品离子在不同的离子强度（或pH）溶液中对一定的离子交换剂的平衡常数不同，在洗提过程中，通过不断改变洗提的离子强度（pH不变）[根据实验的具体情况，也可同时改变离子强度和pH]，以逐步改变样品中各组分与离子交换剂的交换能力，最后得到分离，这种层析方式即称为梯度洗提层析。 稀释倒平板法 先将待分离的材料用无菌水作一系列的稀释（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然后分别取不同稀释液少许，与已溶化并冷却至 45 ℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后，制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出出菌落。如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。 影响泳动的主要因素有哪些。 (1)影响泳动的首要因素是电泳样品的物理性质：包括电荷多少、分子大小、颗粒形状和空间结构。一般来说颗粒带电荷的密度愈大，泳动速率愈快；颗粒物理形状愈大，与支持物介质摩擦力越大，泳动速度越小。即泳动率与颗粒的分子大小，介质粘度成反比；与颗粒所带电荷成正比。在检测未知DNA分子量时，DNA分子的空间构型不同，即使相同的分子量其迁移率也不同。如质粒DNA存在闭环(Ⅰ型，CC)，单链开环(Ⅱ型，OC)和线性(Ⅲ型，L)。三者之间的迁移速率，一般为Ⅰ型Ⅲ型Ⅱ型，但是有时也会出现相反的情况，因为与琼脂糖浓度、电流强度、离子强度及溴乙锭染料含量有关。当胶浓度较高或电场强度较大时，Ⅰ型DNA与Ⅲ型DNA互换位置，而Ⅱ型DNA总是迁移最慢。 (2)支持物介质：DNA的凝胶电泳常使用两种支持材料：琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶。通过这两种介质的浓度变化调整所形成凝胶的分子筛网孔大小，分离不同分子量的核酸片段。琼脂糖凝胶的孔径大，可以分离长度为100bp至近60kb的DNA分子；聚丙烯酰胺凝胶的孔径小，可分离小片段(5～500bp)DNA，效果最好。因此，选用不同的凝胶种类和浓度可以分辨大小不同的DNA片段。 (3)电场强度：电泳场两极间单位支持物长度的电压降即为电场强度或电压梯度。电场强度愈大，带电颗粒的泳动速率愈快，但凝胶的有效分离范围随电压的增大而减小。在低电压时，线性DNA分子的泳动率与电压成正比。一般凝胶电泳的电场强度不超过5V／cm；对于大分子量真核基因组DNA片段的电泳常采用0.5～1.0V／cm电泳过夜，以取得较好的分辨率和整齐的带型。电压1000～2000V，电场强度20～600V／cm的电泳为高压电泳，必须用聚丙烯酰胺做介质。 (4)缓冲液离子强度：缓冲液是电泳场中的导体，它的种类、pH值、离子浓度直接影响电泳的效率。Tris.C1缓冲体系中，由于Cl—的泳动速度比样品分子快得多，易引起带型不均一现象，所以常利用TAE、TBE和TPE三种缓冲体系。缓冲液的pH值直接影响DNA解离