大孔吸附树脂分离富集九节茶浸膏中迷迭香酸研究.docVIP

大孔吸附树脂分离富集九节茶浸膏中迷迭香酸研究 　　[摘要]　目的　考察大孔吸附树脂对九节茶浸膏中迷迭香酸的吸附性能和纯化效果，寻找分离富集迷迭香酸较优的技术工艺。　方法　以迷迭香酸的吸附量和解析率为指标，从6种不同类型大孔树脂中筛选出较好的HPD-400树脂；以动态实验中迷迭香酸转移率及所得干膏中迷迭香酸的含量对树脂分离富集的最佳工艺进行筛选。　结果　HPD-400树脂分离效果最佳，采用HPD-400树脂从九节茶浸膏中分离富集迷迭香酸的较优工艺参数为：上样体积4BV，速度2BV/h，收集洗脱液3BV，洗脱溶剂为70%乙醇。按照此工艺，迷迭香酸的平均过柱转移率为88.70%，洗脱液浓缩干燥后，所得干膏中迷迭香酸平均含量为4.57%，较原九节茶浸膏提高了5.2倍。树脂经5次重复使用，分离效果无明显下降，可以重复使用。　结论　HPD-400树脂可以用于分离富集九节茶浸膏中迷迭香酸，达到了“去粗存精”的目的，具有潜在的工业应用价值。 　　[关键词]　九节茶浸膏；迷迭香酸；分离；纯化；树脂 　　[中图分类号]　R284 [文献标识码]　A [文章编号]　1673-7210（2012）12（c）-0128-04 　　九节茶系金粟兰科植物草珊瑚Sarcandra　glabra（Thunb.）Nakai的干燥地上部分（肿节风为其全株[1]），收载于《广东省中药材标准》（第一册），具有抗菌消炎及肿瘤抑制作用[2]，主要化学成分为有机酸、倍半萜、黄酮及香豆素类化合物等[3-5]，文献报道[6]提示九节茶浸膏中含量较高的迷迭香酸为其中的抗炎活性成分。但尚未见从九节茶中分离富集迷迭香酸的工艺研究报道。近年来，随着大孔树脂在天然药物活性成分分离纯化方面应用的日益广泛[7-10]，其良好的分离效果和低成本可重复利用的特点，适合于生产的要求。因此，本实验采用大孔树脂法对九节茶浸膏中迷迭香酸的分离富集工艺进行研究，以期为九节茶相关制剂的工业化生产提供合理、经济、简便的分离富集工艺。 　　1　仪器与试药 　　1.1　仪器 　　Waters　E2695　Separetiongs　Module　HPLC系统，Waters　2998二级管阵列检测器和Empower软件；METTLER　AE240天平；BFX5-320型低速离心机；电热恒温震荡水槽；电热恒温鼓风干燥箱DHG-9240A；三用恒温水箱DK-600S；数控超声波提取器。 　　1.2　试药 　　D101大孔吸附树脂，国药集团化学试剂有限公司产品；XAD-4，XAD-16均为aladdin产品，HPD-400，HPD-600，HPD-826均为沧州宝恩吸附材料科技有限公司产品；迷迭香酸对照品（批号：111871-201001，中国药品生物制品检定所）；九节茶浸膏（批号由三明华健生物工程有限公司参照《中国药典》2010年版一部“肿节风浸膏”制法项下工艺生产提供）；乙腈为色谱纯（Fisher公司）；乙醇为分析纯；水为超纯水，其他试剂均为分析纯。 　　2　方法与结果 　　2.1　迷迭香酸的含量测定[11-12] 　　2.1.1　色谱条件 色谱柱：Hypersil　ODS（4.6　mm×250　mm，5　μm）；流动相：A为乙腈（含0.1%甲酸），B为0.1%甲酸溶液，梯度洗脱；柱温：30℃；检测波长：330　nm；进样量：20　μL；流速：1　mL/min。在上述条件下，流动相梯度洗脱程序及流速见表1，色谱图见图1、2。 　　2.1.2　迷迭香酸标准曲线的制备 精密称取迷迭香酸对照品6.15　mg，置25　mL量瓶，加60%甲醇溶液稀释定容至刻度，混匀，作为对照品母液，备用。精密量取母液5.0、2.5、1.0、0.5、0.1　mL分别置于10　mL量瓶，加60%甲醇溶液稀释定容至刻度，摇匀。按上述色谱条件进样20　μL进行测定，记录迷迭香酸对应的峰面积。以进样量为横坐标（x），峰面积为纵坐标（y），线性回归方程为y　=　60　125x-57　905，r　=　0.999　5，表明迷迭香酸在2.46～123.00　μg/mL范围内进样量与色谱峰面积具有良好的线性关系。 　　2.1.3　上柱溶液的制备及测定 称取九节茶浸膏300　g，加入水3　000　mL，超声搅拌溶解，离心（3　600　r/min，15min），取上清液备用。精密量取上清液2　mL，置100　mL量瓶，加水稀释定容至刻度，0.45　μm滤膜过滤，按“2.1.1”项下条件进样，测定迷迭香酸含量为0.87%。 　　2.2　树脂的预处理 　　取上述6种树脂分别以95%乙醇浸泡24　h，充分溶胀，用乙醇洗至流出液加水（1∶5）无白色浑浊现象，再用蒸馏水洗至无醇味即得。 　　2.3　静态实验 　　2.3.