LY2.2.1动物细胞培养和核移植技术幻灯片.pptVIP

让学生思考如下问题： 1、从个体发育的角度看，选取什么样的组织作为培养对象？ 2、怎样将动物活体组织分散成单个细胞？可以用胃蛋白酶处理吗？为什么？蛋白酶处理组织会不会破坏细胞的结构？ 3、培养基是用液体的还是固体的？培养基中应加入哪些营养物质？ 4、培养动物细胞时放在什么样的温度下，对培养液的PH值有什么要求？培养瓶中的气体由要求吗？ 5、怎样防止培养液当中混入细胞菌或病毒？ 6、动物细胞能无限增殖下去吗？——一般10代以内可以保持正常核型不断增殖，从10代到50代细胞增殖会逐渐减慢直至完全停止。少数细胞由于传代过程中细胞核型发生改变突破了接触抑制可无限增殖下去成为不死性的细胞。 动物细胞培养（基础） 动物细胞核移植 动物细胞融合 生产单克隆抗体（应用） 动物细胞工程 2.2 动物细胞工程 动物细胞培养技术？ 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 其他动物细胞工程技术的基础 原理：细胞增殖 注意关键词: 细胞贴壁 接触抑制 原代培养 传代培养 动物组织块 细胞悬液 原代培养 传代培养 胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理 胚胎或幼龄动物的组织或器官 加入培养液 用胰蛋白酶等处理贴壁细胞 适宜条件 细胞贴壁（贴壁生长） 接触抑制 原因：分裂增殖能力强，分化程度低。 剪碎 目的：使细胞与培养液充分接触。 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质，将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 原代培养：将动物的器官或组织用胰蛋白酶处理，分散成单个细胞，然后制成细胞悬液，放入培养瓶内，放在适宜的条件下培养，这种培养叫原代培养。 贴壁生长 接触抑制 特点 悬浮液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上称为细胞贴壁（贴壁生长）。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞数目不断增多，当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 传代培养： 原代培养的细胞由于接触抑制不在分裂，还要用胰蛋白酶处理，配制成细胞悬液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 10代以内:保持正常二倍体核型,遗传物质不变。 10代﹣50代: 细胞增殖放缓，大部分完全停止生长，部分细胞的遗传物质可能改变。 50代后: 少部分细胞获得不死性，癌变，细胞膜表面糖蛋白减少，失去接触抑制，可形成多层细胞。 培养器皿 补充合成培养基中缺乏的物质 培养液和培养用具杀菌消毒； 培养过程加抗生素杀菌； 定期更换培养液，清除代谢废物。 2、营养 葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。 3、温度和pH 36.5 ±0.5℃ ；PH为7.2-7.4。 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5%CO2） O2： 是细胞代谢所必须的； CO2：主要作用是维持培养液的pH。 动物细胞培养的条件？ 1、无菌、无毒的环境 （1）生产蛋白质生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等； （2）获得大量自身的皮肤细胞，用于植皮； （3）用于检测有毒物质； （4）用于生理、病理、药理等方面的研究，为治疗和预防疾病提供理论依据。 动物细胞培养技术的应用 植物组织培养和动物细胞培养的比较 比较项目 植物组织培养 动物细胞培养 原理 培养基性质 固体培养基 培养基特有成分 蔗糖 植物激素 培养结果 植物个体或细胞产品 培养目的 获得细胞或细胞分泌蛋白 细胞的全能性 细胞增殖 液体培养基 葡萄糖 动物血清 大量产生细胞或细胞产物 快速繁殖、培育无病毒植株 思考1： 动物细胞培养液的主要成分是什么？较植物组培培养基有何独特之处？ 主要成分：葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。 独特之处有：1、液体培养基 2、成分中有动物血清等 在动物细胞培养过程中，为什么要用胰蛋白酶 对取出的动物组织进行处理？能否用胃蛋白酶？ 胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞。动物细胞培养适宜的pH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 P44 思考2： 但是，要严格控制消化时间，长时间作用会消化细胞膜蛋白，造成细胞损伤。 我们能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体？动物细胞是否具有像植