医学-类设计性实验.doc

医学类设计性实验 设 计 书 实验名称: E-test法测万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度 实 验 班 级: 临床11203 实验负责人: 郑文静 电 话 : 填 报 日 期: 长江大学医学院病原生物学部 2014年4月 目录 TOC \o 1-3 \h \z \u HYPERLINK \l _Toc一、实验成员及分工 PAGEREF _Toc \h 1 HYPERLINK \l _Toc二、实验内容和意义摘要 PAGEREF _Toc \h 1 HYPERLINK \l _Toc三、实验设计依据 PAGEREF _Toc \h 2 HYPERLINK \l _Toc四、实验方案 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc1、本实验的具体内容 PAGEREF _Toc \h 4 HYPERLINK \l _Toc2、实验方法与路线 PAGEREF _Toc \h 6 HYPERLINK \l _Toc六、预期结果及分析 PAGEREF _Toc \h 10 HYPERLINK \l _Toc七、参考文献 PAGEREF _Toc \h 10 第 第 PAGE \* MERGEFORMAT 1 页 共 NUMPAGES \* MERGEFORMAT 13 页 一、实验成员及分工 实验名称 E-test法测万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度 实验成员 序 号 姓 名 主 要 特 长 实 验 中 的 分 工 签 名 1 郑文静 修改，整合材料，PPT放映答辩 2 杨亚红 选题，材料整理 3 何燕 补充，材料整理 4 唐莹 查找文献，制作设计初稿 二、实验内容和意义摘要 金黄色葡萄球菌是人类的一种重要病原菌，引起许多严重感染。典型的金黄色葡萄球菌为球形，直径0.8μm左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽孢、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性2.由于金黄色葡萄球菌是临床上各种感染性疾病的常见致病菌，同时治疗上金黄色葡萄球菌对青霉素和红霉素等都有很大的耐药性。而对于为重感染尤其是耐药性的基因变异较多的金黄色葡萄球菌菌株感染的治疗3.万古霉素泽被认为是最后一道防线。VAN是分子量为 1450 的中分子，属于三环糖肽类抗生素，1958年由美国 FDA 批准上市，在临床上使用了 50 余年。主要通过直接与细菌细胞壁肽聚糖前体五肽侧链末端 D-丙胺酰-D-丙氨酸结合，阻止肽聚糖多聚酶的转肽作用，干扰细菌细胞壁肽聚糖前体的交叉连结，使细胞壁不能形成三维空间结构而发挥杀菌效果大量临床研究表明万古霉素的副作用极大，容易导致机体致死。 为了充分发挥万古霉素疗效的同时，将不良反应发生率和严重程度降到最低是临床用药的关键。因此根据患者的临床情况实施个体化用药尤其重要。故通过一定实验测得万古霉素对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度很有必要。为了解本地区金黄色葡萄球菌对万古霉素的MIC,通过E-text(浓度梯度琼脂扩散试验) 进行检测分析检测出抑菌圈直径记录数据作出曲线图的方法测对本地区分离到的儿童携带菌株，儿童临床株和成人临床菌株进行对照研究。 三、实验设计依据 金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度为350C-370C，最适生长PH为7.4-7.6。在血平板上孵育24h后，出现较大、直径为6^-8mm、光滑、完整、稍隆起、半透明的菌落，通过革兰氏染色后在显微镜下观察呈短链状、簇状排列，状如“葡萄”，产金黄色或橙色色素，并在菌落周围形成透明溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10%-15%NaCI琼脂中生长，接种于高盐琼脂平板上有利于菌种的检出。生化反应活泼，可分解多种糖类和蛋白质，产酸不产气，触酶和凝固酶阳性，抵抗力强，在干燥环境下也可存活数周，对多种抗生素和消毒剂均不敏感。金黄色葡萄球菌在现实生活中广泛存在，可定植在健康人的鼻、喉、咽等处，通常不致病。但当免疫系统功能降低时，纵然没有伤口，体内定植的菌株仍然可以引起疖等局部化脓性感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、坏死性筋膜炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。食物中此菌经过正常烹煮可被杀灭，但细菌在被杀灭前会分泌毒素，此毒素仍可以引起食用者的急性中毒症状，如恶心、呕吐、腹泻等。常见的致病因素主要是其产生的毒素和侵袭性酶。 近年来随着临床上万古霉素使用量的不断增加以及无选择性地将万古霉素作为预防性用