南京科捷液相识讲座2.ppt

欢迎光临 日程安排 HPLC 维护 Younglin HPLC 日常维护 常见问题解答FAQ 日常使用及维护现场演示 韩国英麟机器北京代表处技术服务中心 赵紫来 (O)010 zhaozilai@ 进样器漏液 IV. 色谱柱可能引起的问题 当我们拥有了一根新的色谱柱，我们如何检测它的初始柱效能? 检查新柱子 1. 柱效检查 柱效的检查可以在色谱柱使用前，根据厂家提供的色谱柱报告上的方法及混合样品来测定。 2. 压力检查 正常分析条件下，初始色谱柱操作压力应该记录下来，作为今后实验的参考。 3. 保护柱 应尽量使用保护柱，但应注意不要给系统增加过大的压力。 操作中的注意事项. 作为新色谱柱，最好在使用前，低于分析流速下（0.2-0.3ml/min）过大约30分钟。色谱柱如果长时间没有使用，再次投入使用前，也要做相似的工作。 2. 关机时，最好逐步降低流速，不要突然降低压力，这样对色谱柱以及系统都会有影响。 3. 当使用缓冲溶液时，切记要先用水冲洗系统，再改用有机溶剂，这样可以避免结晶现象出现，堵塞柱子。 操作中的注意事项 使用前，最好过滤流动相及样品，避免颗粒物产生堵塞。 5. 样品最好溶解在流动相中，如果不是，最好也要接近流动相的组成。这样会减少样品在流动相中的不溶物沉淀在柱子中。 6. 日常使用后，可用强溶剂冲洗色谱柱。例如：ODS柱每天使用完后，可用乙腈冲洗色谱柱，以除去柱子中强吸收的样品。 色谱柱的问题及解决办法 柱筛板或柱吸附了样品或溶剂的杂质形成化学结晶,或者保存包装不当,使柱子填充材料干燥, 会引起下列问题 系统压力增高,峰型不好(拖尾,前伸,分叉),保留时间改变. 色谱柱的问题及解决办法 筛板或色谱柱填料 预先要用0.45um的滤膜过滤样品和流动相，如果样品很脏的话，需要用0.25um的滤膜过滤。 尽管如此，有时候由于实验时间有限，流动相或是样品处理不彻底，还会有脏东西进入系统，造成堵塞。 色谱柱的问题及解决办法 正常情况下，用强溶剂冲洗色谱柱，可以除去这些颗粒。但有时不溶的颗粒用这种方法很难除去，这时，可以考虑反冲色谱柱。 注意：这时不要连接检测器。 最终，如果冲洗不能解决问题的话，可以更换过滤筛板。但是更换时要很小心，不要破坏柱床，否则柱效会降低。不锈钢筛板是固定在色谱柱上的，所以尽量不要更换。 吸附样品 溶剂杂质 色谱柱的问题及解决办法 杂质将会导致峰托尾. 可以用强溶剂冲洗色谱柱. 填料的化学腐蚀 色谱柱的问题及解决办法 注意：对于基于聚合物的色谱柱，必须要检查每一项的值 填料干枯 色谱柱的问题及解决办法 一般来讲，特别对于聚合物色谱柱，填料膨胀的特性依赖于溶剂。因此，当色谱柱干了的时候，填料有可能发生变形。 特别是GPC色谱柱，溶剂的选择非常特殊。 不仅要避免干枯，而且不能使用错误的溶剂，否则整个聚合物色谱柱的特性（形状及粒径）都有可能发生变化。 V.检测器有可能引发的问题 基线漂移. 废液瓶 务必保证废液管没有深入到废液中，否则的话，检测池的压力很容易升高。 检测器带来的问题 VI. 其他类型的问题 1. 系统大的压力波动. 2. 系统高压. 3. 基线不稳 A. 漂移 B. 噪音 4. 峰形变化 A. 不对称 (前伸 / 拖尾) B. 分叉 1. 系统中大的压力波动. 可能的原因 : 系统漏液 单向阀被污染 在线过滤器被污染 柱塞密封圈坏/漏 解决办法 : 1. 检查连接处或是检测池是否有漏液。特别是任何新出现的连接处（如：新柱子/检测器之间）。有时，特别是用PEEK材质的管线连接时，如果加过高压后，连接部分可能会松，也容易漏。 2.如果没有发现漏液，接下来要检查泵头的后面。在泵头后面，管线连接着洗涤瓶。如果密封垫漏液，液体有时可以流出。如果洗涤瓶的水面看起来上升了，说明泵头漏液。如果漏液可以观察到，那么说明柱塞杆受到破坏。需要更换柱塞杆密封垫。 注意：(A) 更换泵密封垫时，需要半小时老化新垫，在这个期间，可能会出现压力波动，这是正常的。 （B）更换柱塞密封垫时，一定要注意观察柱塞杆，如果出现划痕，应更换柱塞杆，否则密封垫也很容易被损坏。 3.如果,没有发现泵头泄露,,就要检查单向阀或在线过滤器.它们可以移下来先用IPA(异丙醇)后用水超声波清洗(各15分钟), 对于顽固的污点,可以使用1N的硝酸,如果还不行,更换单向阀. 1.系统中大的压力波动 2. 系统压力增高 可能的原因 : 1. 堵塞 A. 检测池 B. 柱压力慢慢变大 C. 泵 D. 混和气 E. 管线