无菌与微生物限度检查实验室管理.docx

无菌及微生物限度检查实验室管理一、?实验室设施开展无菌检查及微生物限度检查工作，首先要按照《药品检验所实验室质量管理规范》及《药品生产质量管理规范》的要求，建立一个布局合理、使用方便、操作安全的无菌室，并且配有完善的实验设施和管理制度。无菌检查、微生物限度检查以及接种室（接种对照菌、菌种传代）均应严格分开，具有危险性的毒株、毒素如破伤风梭菌、黄曲霉毒素的实验室需单独使用，以便控制防止传播。（一）无菌室1结构与要求：无菌室不宜设在底层，防潮、防霉、采光好，远离交通干道，厕所及污染区，面积不超过10m2，高度不超过24m，由两个缓冲间、操作间组成。操作间缓冲间之间应有样品传递窗，出入操作间和缓冲间的门不应直对。无菌室内应六面光滑平整，无缝隙，不起灰，不落尘，耐腐蚀，易清洗，墙壁与地面、墙壁与天花板连接处应呈凹弧形，操作间不得安装下水道。无菌室内的照明灯应嵌装在天花板内，采光面积要大，光照应分布均匀，光照度不低于300勒克斯。缓冲间和操作间应装有紫外线杀菌灯（2－25w/m3）用于空气消毒。紫外线波长200－300nm者具有杀菌作用，其中以265－266nm杀菌作用最强，这与DNA的吸收光谱范围一致，其杀菌机理可能是在细菌细胞DNA中引起胸腺嘧啶双聚体形成，从而干扰细菌细胞DNA复制，导致细菌变异死亡。紫外线杀菌灯1m以内距离杀菌效果最佳，每次开灯照射时间为30min。应定期检查紫外线灯辐射强度，不得低于70μW·cm-21m距离。其缺点是穿透力弱，一张纸板可以阻碍光的透过，不能穿透固体物，故只能用作表面消毒及一些不耐热或化学消毒剂物品的消毒。2温度、湿度无菌室内温度和相对湿度直接影响紫外杀菌灯的杀菌效果，故温度应控制在25±2℃，相对湿度40－60％。操作间或净化工作台的洁净空气应保持对环境形成正压，不低于49Pa。3操作间无菌室内应安装空气除菌过滤层流装置及调温装置。洁净度要求：净化工作台洁净度为100级，无菌室应为10000级。操作间应准备乙醇灯（或煤气灯），火柴，2％碘酊棉球及75％乙醇棉球、试管架、大小橡皮乳头、砂轮、记号笔、无菌剪刀、镊子、注射器等。微生物限度检查无菌室操作间内还应有电子称（感觉为01g，最大称量为300g为宜），电动匀浆仪等。4．缓冲间缓冲间内应有洗手盆，消毒液，无菌衣，帽，口罩，拖鞋等，缓冲间内不应放置培养箱和其他杂物。 物流缓冲操作台 人流缓冲无菌室 ⅠⅡ操缓缓无菌室作冲冲台 操Ⅱ作无菌室缓台冲Ⅰ缓冲 （二）洁净级别及检查方法98年国家药监局颁布药品生产质量管理规范，把药品生产洁净区空气洁净度划分为四个级别：空气洁净度级别表─────────────────────────────────────尘埃数／立方米活微生物数（个）洁净级别──────────────────────────────≥05μm≥5μm浮游菌／立方米沉降菌／皿─────────────────────────────────────100级≤3500≤0≤5≤110000级≤35万≤2000≤100≤3100000级≤350万≤2万≤500≤10300000级≤1050万≤6万－≤15─────────────────────────────────────洁净级别的检查方法通常采用尘埃数及浮游菌数或沉降菌数测定法。尘埃数的测定：用尘埃粒子计数仪测定，取样高度离地面1米，间距05-2米，每个测试点连续采样3－5次，仪器显示测定结果。浮游菌数的测定，采用浮游菌测定仪。沉降菌数测定：方法：无菌室及净化工作台面消毒擦拭后，打开层流净化装置及净化工作台开关30min，将营养琼脂平板3个及玫瑰红钠琼脂平板3个（直径9cm），置净化工作台左、中、右各1个，开盖暴露30min后将盖盖上，分别放在30－35℃培养箱内培养48h及25－28℃培养箱内培养72h，细菌和真菌平均菌落数小于等于1个为100级。实验室一旦被污染，洁净度达不到要求，可以清洗或更换净化工作台过滤器，用甲醛或丙二醇、乳酸熏蒸消毒，方法：在支架上放一个烧杯（内装少许甲醛，8ml／平方米），下面放一个装有少许乙醇的乙醇灯，点燃后，关闭门窗，乙醇用尽后灯自灭，甲醛蒸气充满无菌室，密闭24h。缺点：甲醛蒸气易锈蚀仪器，对人有刺激，可用氨水喷雾中和，减少对人眼的刺激。二、实验室管理制度：为保证实验工作有序进行，实验室必须制定一系列实验室管理制度。（一）?实验室要求：1实验室环境应清洁、卫生、安静，实验室内严禁吸烟和饮食。2实验人员必须穿戴工作衣帽，工作服经常洗涤、消毒、保持清洁。3操作前后或离开实验室必须用肥皂或消毒液洗手。4发生菌液污染台面或地面，应立即用3％甲醛或5％碳酸等消毒液由外向内倾